АлАТ-КІН (кінетичний метод)

ПРИЗНАЧЕННЯ

Набір застосовується для визначення активності аланінамінотрансферази (АлАТ) у сироватці крові та плазмі людини кінетичним методом в клініко-діагностичних і біохімічних лабораторіях і науководослідницькій практиці.

• Лінійність методу повинна зберігатися до швидкості зміни оптичної щільності (ΔЕ/хв) 0,16 для хвиль Hg 334 нм, 340 нм або 0,08 для Hg 365 нм.
• Діапазон визначаємих активностей - від 3,9 МОд/л до 600 МОд/л.
• Коефіцієнт варіації визначення- не більше 5 %
• Чутливість 6 на 0,001 од. оптичної щільності/хв – не більше 3,5 МОд/л (365 нм).
• Зберігання набору - при температурі від плюс 2 °С до плюс 8 °С.
• Гарантійний термін придатності набору - 12 місяців від дня виготовлення.
• Набір призначений для застосування in vitro тільки кваліфікованим лабораторним персоналом.

ПРИНЦИП МЕТОДУ

АлАТ каталізує перенос аміно-групи від L-аланіну до α-оксоглютарату в результаті чього утворюються піруват та L-глютамат. Отриманий піруват під час спряженої реакції, що каталізується лактатдегідрогеназою (LDH) вступає в реакцію з NADH, в присутності іонів водню. Продуктами цієї реакції є Lлактат та NAD+.

L-аланін + α-оксоглютарат ←АлАТ → піровиноградна кислота + L-глутамат

піровиноградна кислота + NADH + H+ ←ЛДГ → L-лактат + NAD+

(НАДН и NAD+ - дві форми β-нікотінамід аденін дінуклеотиду)

Перетворення NADH в NAD+ супроводжується зміною в спектрі поглинання на довжині хвилі 340 або 334 або 365 нм, при цьому зменшення оптичної щільності розчину прямо пропорційне активності АлАТ в дослідній пробі.

СКЛАД НАБОРУ

1. Буферно-субстратний розчин АлАТ

• ТРІС буфер (100,0 ± 5,0) ммоль/л,
• L-альфа-аланін (0,500 ± 0,025) моль/л,

НР001.02 - 1 флакон з (40 ± 2) мл; НР001.03 - 2 флакони по (40 ± 2) мл; НР001.04 - 4 флакони по (100 ± 2) мл;

2. Коензим-ензимний реагент

• 2-оксоглутарова кислота (15,00 ± 0,75) ммоль/л
• NADH (0,180 ± 0,009) ммоль/л
• лактат-дегідрогеназа (LDH) >1200 Од/л

НР001.02 - 1 флакон з (10,0 ± 0,5) мл; НР001.03 - 2 флакони по (10,0 ± 0,5) мл; НР001.04 - 1 флакон з (100 ± 2) мл;

АНАЛІЗУЄМИЙ МАТЕРІАЛ

• Сироватка. Матеріал стабільний протягом 3 діб при температурі від плюс 2 град. до плюс 8. Якщо зберігати сироватку при кімнатній температурі, активність ферментів знижується. Активність ферменту в сироватці знижується після 3 діб зберігання при температурі від плюс 18 °С до плюс 25 °С - на 17%. УНИКАТИ ГЕМОЛІЗУ!

• Плазма. Гепаринізована або ЭДТО-плазма.

ОБЛАДНАННЯ

1. Фотометричне обладнання, яке здатне вимірювати оптичну щільність розчинів при довжині хвилі 334, 340 або 365 нм в діапазоні (0-1,0) од. опт. щільності та довжині оптичного шляху 10 мм. (Можливo використання автоматичного аналізатора. Інструкція для автоматичного аналізатора висилається за замовленням споживача.)

2. Водяний термостат або автоматична водяна баня, які здатні підтримувати температуру (плюс 37 ± 0,5)°С.

3. Піпетки місткістю 1, 0.1 та 5 мл (ДСТУ EN ISO 835:2018)