АлАТ-КИН (кинетический метод)

НАЗНАЧЕНИЕ

Набор применяется для определения активности аланинаминотрансферазы (АлАТ) в сыворотке крови и плазме человека кинетическим методом в клинико-диагностических и биохимических лабораториях и научно-исследовательской практике.

• Линейность метода должна сохраняться до скорости изменения оптической плотности (ΔЕ/мин) 0,16 для волн Hg 334 нм, 340 нм или 0,08 для Hg 365 нм.
• Диапазон определяемых активностей - от 3,9 МЕд/л до 600 МЕд/л.
• Коэффициент вариации определения - не более 5 %.
• Чувствительность 6 на 0,001 ед. оптической плотности/мин - не более 3,5 МЕд/л (365 нм).
• Хранение набора - при температуре от плюс 2 °С до плюс 8 °С.
• Гарантийный срок годности набора - 12 месяцев со дня изготовления.
• Набор предназначен для применения in vitro только квалифицированным лабораторным персоналом.

ПРИНЦИП МЕТОДА

АлАТ катализирует перенос амино-группы от L-аланина к α-оксоглютарату в результате чего образуются пируват и L-глютамат. Полученный пируват во время сопряженной реакции, катализируемой лактатдегидрогеназой (LDH) вступает в реакцию с NADH, в присутствии ионов водорода. Продуктами этой реакции являются Lлактат и NAD+.

L-аланин + α-оксоглютарат ←АлАТ → пировиноградная кислота + L-глутамат

пировиноградная кислота + NADH + H+ ←ЛДГ → L-лактат + NAD+

(НАДН и NAD+ - две формы β-никотинамид аденин динуклеотида)

Превращение NADH в NAD+ сопровождается изменением в спектре поглощения на длине волны 340 или 334 или 365 нм, при этом уменьшение оптической плотности раствора прямо пропорционально активности АлАТ в опытной пробе.

СОСТАВ НАБОРА

1. Буферно-субстратный раствор АлАТ

• ТРИС буфер (100,0 ± 5,0) ммоль/л,
• L-альфа-аланин (0,500 ± 0,025) моль/л,

НР001.02 - 1 флакон с (40 ± 2) мл; НР001.03 - 2 флакона по (40 ± 2) мл; НР001.04 - 4 флакона по (100 ± 2) мл;

2. Коэнзим-энзимный реагент

• 2-оксоглутаровая кислота (15,00 ± 0,75) ммоль/л
• NADH (0,180 ± 0,009) ммоль/л
• лактат-дегидрогеназа (LDH) >1200 Ед/л

НР001.02 - 1 флакон с (10,0 ± 0,5) мл; НР001.03 - 2 флакона по (10,0 ± 0,5) мл; НР001.04 - 1 флакон с (100 ± 2) мл;

АНАЛИЗИРУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ

• Сыворотка. Материал стабилен в течение 3 суток при температуре от плюс 2 град. до плюс 8. Если хранить сыворотку при комнатной температуре, активность ферментов снижается. Активность фермента в сыворотке снижается после 3 суток хранения при температуре от плюс 18 °С до плюс 25 °С - на 17%. ИЗБЕГАТЬ ГЕМОЛИЗА!

• Плазма. Гепаринизированная или ЭДТО-плазма.

ОБЛАДНЕНИЕ

1. Фотометрическое оборудование, которое способно измерять оптическую плотность растворов при длине волны 334, 340 или 365 нм в диапазоне (0-1,0) ед. опт. плотности и длине оптического пути 10 мм. использование автоматического анализатора. Инструкция для автоматического анализатора высылается по заказу потребителя.)

2. Водяной термостат или автоматическая водяная баня, которые способны поддерживать температуру (плюс 37 ± 0,5)°С.

3. Пипетки вместимостью 1, 0.1 и 5 мл (ДСТУ EN ISO 835:2018)