Набор предназначен для количественного определения активности α-амилазы в биологических жидкостях в клинико-диагностических, биохимических лабораториях и научно-исследовательской практике. Набор рассчитан на соответствующее количество определений активности α-амилазы.
- Диапазон определяемых активностей - от 7 МОд/л до 2000 МОд/л.
- Коэффициент вариации в серии - не более 5 %.
- Чувствительность 10 на 0,001 ед. оптической плотности/мин – не более 4 МОд/л (405 нм).
- Хранение набора - при температуре от плюс 2 °С до плюс 8 °С.
- Гарантийный срок годности набора - 12 месяцев со дня изготовления.
- Набор предназначен для применения in vitro только квалифицированным лабораторным персоналом.
ПРИНЦИП МЕТОДА
Под действием α-амилазы синтетический субстрат CNP-G3 (олигосахарид, меченный галогенизированным производным пара-нитрофенола) гидролизуется с образованием свободного галогенизированного производного пара нитрофенола, имеющего максимум поглощения при длине волны 405 нм. Измеренный за единицу времени прирост оптической плотности реакционной смеси прямо пропорционален активности α-амилазы в исследуемом образце. Особенностью данного субстрата, отличающей его от других синтетических субстратов α-амилазы, является одностадийность ферментативного гидролиза и практически идентичная его аффинность к активным центрам различных изоформ α-амилазы, что существенно повышает корректность и воспроизводимость полученных результатов.
СОСТАВ НАБОРА
- Реагент на α-амилазу рН (6,0 ± 0,1)
- MES – 50 ммоль/л;
- CaCl2 – 2 ммоль/л;
- NaCl – 100 ммоль/л.
- CNP-G3 – 5 ммоль/л;
ОБРАЗЕЦ
Сыворотка крови, Li- или Na-гепаринизированная плазма. Гемолиз недопустим. Центрифугировать кровь как можно быстрее. Образцы стабильны при температуре от плюс 2 °С до плюс 8 °С до 7 суток 11. Моча. Образцы нестабильны в кислой среде. Довести кислотность образца до значения рН 7 перед хранением. Хранить при температуре от плюс 2 °С до плюс 8 °С не более 7 суток 1,7.
ОБОРУДОВАНИЕ
-
Фотометрическое оборудование, способное измерять оптическую плотность растворов при длине волны 405 (400-415) нм в диапазоне (0-1,0) ед. опт. плотности и длине оптического пути 10 мм (Возможно использование автоматического анализатора. Инструкция для автоматического анализатора высылается по заказу потребителя).
-
Водяной термостат или баня, обеспечивающая инкубацию пробирок при температуре плюс (37,0 ± 0,3) °С.
-
Пробирки емкостью 10 мл (согласно действующим нормативным документам).
-
Пипетки емкостью 0,1 и 5 мл (ДСТУ EN ISO 835:2018).
ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАБОЧИХ РАСТВОРОВ
Реагент на α-амилазу. Готов к использованию. Раствор стабилен после первого вскрытия оригинальной упаковки в течение 8 недель при температуре от плюс 2 °С до плюс 8 °С. Тщательно закрывайте флакон непосредственно после каждого использования реактива. Раствор светочувствительный. Максимальная экстинкция Реагента на α-амилазу против воды при 405 нм - 0,4 ед. опт. плотности.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Для контроля хода реакции и процедуры измерения рекомендуется использовать контрольные сыворотки со значениями активности, определенными данным методом. Например: Diacon N, Diacon P (Австрия), TruLab N, TruLab P (Германия), «ФилоНорм» или «ФилоПат» (Украина). При любых исследованиях аттестованных контрольных сывороток в качестве референтного значения можно применять данные, указанные для методов с высвобождением пара-нитрофенола из субстрата, полученные при температуре плюс 37°С.
Если значения контроля выходят за пределы установленного диапазона, проверьте оборудование, реактивы и возможные технические проблемы. Каждая лаборатория должна установить собственную внутреннюю систему контроля качества и корректирующие действия, если контроль не соответствует допустимым нормам.
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
α-Амилаза катализирует гидролиз α - 1,4 - связи молекул α-D-глюкозы. В результате образуются
декстраны, мальтоза и молекулы глюкозы.
α-Амилаза синтезируется экзокринной частью поджелудочной железы (Р-тип) и слюнными железами (S
тип), обнаруживается она и в других тканях организма.
Оценка активности амилазы в сыворотке и моче широко применяется для диагностики заболеваний
поджелудочной железы.
Увеличение активности α-амилазы является высокоспецифичным при остром и хроническом панкреатите.
Кроме этого, гиперамилаземия может быть вызвана почечной недостаточностью, острыми состояниями брюшной полости, опухолями легких и яичников, патологией слюнных желез, макроамилаземией, кетоацидозом, заболеваниями желчевыводящих путей, травмой мозга, хроническим алкоголизмом и употреблением опиатов. Снижение активности α-амилазы указывает на экзогенную недостаточность поджелудочной железы при атрофии ацинарной ткани и фиброзе органа у больных, длительно страдающих данным заболеванием.
-
Сыворотка крови: Активность α-амилазы у детей первых двух месяцев низкая; она повышается до уровня взрослых к концу первого года жизни.
↑. Паротит, панкреатит, обтурационная и стангюляционная непроходимость или инфаркт кишки, эктопическая беременность, перфорация полового органа, заболевания желчных путей всех типов, диабетический кетоацидоз, киста или псевдокиста поджелудочной железы, перитонит, макроамилаземия, некоторые опухоли легких и яичников, почечная недостаточность, эндоскопическая ретроградная холангиопанкреатография, абдоминальная травма, повреждение черепа, вирусные инфекции, состояния после операции, алкоголь. ↓. Недостаточность поджелудочной железы, выраженный муковисцидоз, тяжелое поражение печени, панкреаэктомия. -
Моча суточная: См. Сыворотка крови. Однако значения могут быть нормальными или пониженными при почечной недостаточности макроамилаземии. Амилаза в моче может оставаться повышенной в течение 2 недель после приступа острого панкреатита и может предсказать образование псевдокисты.
Клинический диагноз должен устанавливаться на основе интеграции клинических и лабораторных данных.