Білірубін перетворюється у кольоровий комплекс азобілірубіну під впливом діазотованої сульфанілової кислоти у кислому середовищі. З двох фракцій, представлених у сироватці крові, білірубін - глюкоромід і вільний білірубін, які тісно пов'язані з альбуміном, у цій реакції, безпосередньо у водному розчині, приймає участь тільки прямий білірубін, в той час як вільний білірубін потрібно розчинити з диметілсульфоксидом (ДМСО) (визначення непрямого білірубіну). При визначенні непрямого білірубіну визначається також і прямий, результати відповідають загальному білірубіну.

Інтенсивність кольору пропорційна концентрації білірубіну у зразку.

Клінічне значення

Білірубін представляє собою продукт розпаду гемоглобіну, який транспортується від селезінки до печінки та екскретується в жовчні протоки. Гіпербілірубінемія є результатом збільшення концентрації білірубіну у плазмі.

Причини гіпербілірубінеміі: Загальний білірубін. Збільшення гемолізу, генетичні порушення, неонатальна жовтяниця, неефективний ерітропоез та лікарські препарати. Прямий білірубін. Холестаз печінки, генетичні та гепатоклітинні порушення.

Клінічний діагноз не повинен базуватися на одному показникові, необхідно враховувати клінічні та інші лабораторні дані.

Склад набору

Реагент 1. Буфер: Сульфанілова кислота - 30 mmol/l (ммоль/л); соляна кислота - 50 mmol/l (ммоль/л); ДМСО - 7 mol/l (моль/л).
Реагент 2. Буфер: Сульфанілова кислота - 30 mmol/l (ммоль/л); соляна кислота - 150 mmol/l (ммоль/л).
Реагент 3. Нітрит натрію - 29 mmol/l (ммоль/л).
Інструкція з використання.
Сертифікат якості.

Додатковi реагенти

Стандарт білірубіну постачається окремо. Рекомендовано використовувати СпЛ Мультикалібратор виробництва «Лабораторія Гранум» для визначення загального та прямого білірубіну, СпЛ Білірубін Калібратор для визначення загального білірубіну.

Аналітичні характеристики

Лінійність вимірювального діапазону: 1.71 - 300 µmol/l (мкмоль/л). Відхилення від лінійності не перевищує 7%. Якщо отримані результати були більше, ніж межі лінійності, розведіть зразки 1:1 (в два рази) NaCl 9 g/l (г/л) та помножте результат на два.
Чутливість не менш 1.71 µmol/l (мкмоль/л).
Коефіцієнт варіації результатів визначень – не більш 7%.

Матеріал для дослідження

Сироватка або плазма крові. Досліджувані сироватки або плазми повинні бути ретельно відокремлені від формених елементів крові не пізніше, ніж через 1 h (год) після взяття крові. Уникайте використання мутних, ліпідних та гемолітичних зразків (гемоліз змінює рівень білірубіну). Захищати зразки від впливу сонячного світла.

Зразки стабільні при 2-8 ºC протягом 4 d (доб), або 2 mth (міс) при -20 ºC.

Перелік необхідного устаткування

Спектрофотометричне або колориметричне обладнання з довжиною хвилі 555 nm (нм).
Відповідні кювети з товщиною оптичного шару 1 cm (см).
Загальне лабораторне обладнання.

Прим: Набір призначений для роботи на півавтоматичних та автоматичних біохімічних аналізаторах.

Адаптації до приладів надаються за запитом.

Підготовка реагентів

Перед використанням набір витримати при кімнатній температурі протягом 30 min (хв).

Всі реагенти готові до використання.

Умови вимірювання:

довжина хвилі 555 (530-580) nm (нм)
кювета з товщиною оптичного шару 1 cm (см)
температура 15-20ºC

Референтні величини

Ґрунтуючись на результатах досліджень, проведених лабораторіями, рекомендуємо користуватися нормами, приведеними нижче. Разом з тим, відповідно до правил GLP (Гарної лабораторної практики), кожна лабораторія повинна сама визначити для себе параметри норми, характерні для обстежуваної популяції.

Нормальний рівень білірубіну в сироватці або плазмі крові становить:

загальний білірубін до 18.81 µmol/l (мкмоль/л)= 11.0 mg/l (мг/л)
прямий білірубін до 4.27 µmol/l (мкмоль/л) = 2.5 mg/l (мг/л)

Перехід в додаткові одиниці: mg/l (мг/л) х 1.71 = µmol/l (мкмоль/л)

Комплектація

1	2	3
	5.010	5.011
Вміст	200 визн.	600 визн.
Р1	1 х 300 ml (мл)	1 х 900 ml (мл)
Р2	1 х 300 ml (мл)	1 х 900 ml (мл)
Р3	1 х 12 ml (мл)	1 х 32 ml (мл)