Набір призначений для кількісного визначення активності α-амілази у біологічних рідинах в клініко-діагностичних, біохімічних лабораторіях і науково-дослідницькій практиці. Набір розрахований на відповідну кількість визначень активності α-амілази.
- Діапазон визначаємих активностей - від 7 МОд/л до 2000 МОд/л.
- Коефіцієнт варіації у серії - не більше 5 %.
- Чутливість 10 на 0,001 од. оптичної щільності/хв – не більше 4 МОд/л (405 нм).
- Зберігання набору - при температурі від плюс 2 °С до плюс 8 °С.
- Гарантійний термін придатності набору - 12 місяців від дня виготовлення.
- Набір призначений для застосування in vitro тільки кваліфікованим лабораторним персоналом.
ПРИНЦИП МЕТОДУ
Під дією α-амілази синтетичний субстрат CNP-G3 (олігосахарид, мічений галогенізованим похідним пара - нітрофенолу) гідролізується з утворенням вільного галогенізованого похідного пара нітрофенолу, що має максимум поглинання при довжині хвилі 405 нм. Виміряний за одиницю часу приріст оптичної щільності реакційної суміші прямо пропорційний активності α-амілази в дослідному зразку. Особливістю даного субстрату, що відрізняє його від інших синтетичних субстратів α-амілази, є одностадійність ферментативного гідролізу і практично ідентична його афінність до активних центрів різних ізоформ α-амілази, що істотно підвищує коректність і відтворюваність отриманих результатів.
СКЛАД НАБОРУ
- Реагент на α-амілазу рН (6,0 ± 0,1)
- MES – 50 ммоль/л;
- CaCl2 – 2 ммоль/л;
- NaCl – 100 ммоль/л.
- CNP-G3 – 5 ммоль/л;
ЗРАЗОК
Сироватка крові, Li- або Na-гепаринізована плазма. Гемоліз неприпустимий. Центрифугувати кров щонайшвидше. Зразки стабільні при температурі від плюс 2 °С до плюс 8 °С до 7 діб 11. Сеча. Зразки нестабільні в кислому середовищі. Довести кислотність зразка до значення рН 7 перед зберіганням. Зберігати при температурі від плюс 2 °С до плюс 8 °С не більше 7 діб 1,7.
ОБЛАДНАННЯ
-
Фотометричне обладнання, здатне вимірювати оптичну щільність розчинів при довжині хвилі 405 (400-415) нм у діапазоні (0-1,0) од. опт. щільності та довжині оптичного шляху 10 мм (Можливо використання автоматичного аналізатора. Інструкція для автоматичного аналізатора висилається за замовленням споживача).
-
Водяний термостат або баня, яка забезпечує інкубацію пробірок при температурі плюс (37,0 ± 0,3) °С.
-
Пробірки місткістю 10 мл (згідно з чинними нормативними документами).
-
Піпетки місткістю 0,1 та 5 мл (ДСТУ EN ISO 835:2018).
ПРИГОТУВАННЯ РОБОЧИХ РОЗЧИНІВ
Реагент на α-амілазу. Придатний до використання. Розчин стабільний після першого розкриття оригінальної упаковки протягом 8 тижнів при температурі від плюс 2 °С до плюс 8 °С. Ретельно закривайте флакон безпосередньо після кожного використання реактиву. Розчин світлочутливий. Максимальна екстинкція Реагенту на α-амілазу проти води при 405 нм - 0,4 од. опт. щільності.
КОНТРОЛЬ ЯКОСТІ
Для контролю ходу реакції та процедури вимірювання рекомендується використовувати контрольні сироватки із значеннями активності, визначеними даним методом. Наприклад: Diacon N, Diacon P (Австрія), TruLab N, TruLab P (Німеччина), ”ФілоНорм” або „ФілоПат” (Україна). При будь-яких дослідженнях атестованих контрольних сироваток як референтне значення можливо застосовувати дані, вказані для методів з вивільненням пара-нітрофенолу з субстрату, отримані при температурі плюс 37°С.
Якщо значення контролю виходять за межі встановленого діапазону, перевірте обладнання, реактиви та можливі технічні проблеми. Кожна лабораторія повинна встановити власну внутрішню систему контролю якості та коригуючі дії, якщо контроль не відповідає допустимим нормам.
ДІАГНОСТИЧНІ ХАРАКТЕРИСТИКИ
α-Амілаза каталізує гідроліз α - 1,4 - зв’язку молекул α-D-глюкози. В результаті утворюються
декстрани, мальтоза і молекули глюкози.
α-Амілаза синтезується екзокринною частиною підшлункової залози (Р-тип) і слинними залозами (S
тип), виявляється вона і в інших тканинах організму.
Оцінка активності амілази в сироватці і сечі широко застосовується для діагностики захворювань
підшлункової залози.
Збільшення активності α-амілази є високоспецифічним при гострому і хронічному панкреатиті.
Окрім цього, гіперамілаземія може бути викликана нирковою недостатністю, гострими станами черевної порожнини, пухлинами легенів і яєчників, патологією слинних залоз, макроамілаземією, кетоацидозом, захворюваннями жовчовивідних шляхів, травмою мозку, хронічним алкоголізмом і споживанням опіатів. Зниження активності α-амілази вказує на екзогенну недостатність підшлункової залози при атрофії ацинарної тканини і фіброзі органу у хворих, тривало страждаючих даним захворюванням.
-
Сироватка крові: Активність α-амілази у дітей перших двох місяців низька; вона підвищується до рівня дорослих до кінця першого року життя.
↑. Паротит, панкреатит, обтураційна і стангуляційна непрохідність або інфаркт кишки, ектопічна вагітність, перфорація статевого органу, захворювання жовчних шляхів всіх типів, діабетичний кетоацидоз, кіста або псевдокіста підшлункової залози, перитоніт, макроамілаземія, деякі пухлини легенів і яєчників, ниркова недостатність, ендоскопійна ретроградна холангіопанкріографія, абдомінальна травма, пошкодження черепа, вірусні інфекції, стани після операції, алкоголь. ↓. Недостатність підшлункової залози, виражений муковісцидоз, важке ураження печінки, панкреаекоїмія. -
Сеча добова: Див. Сироватка крові. Проте, значення можуть бути нормальними або зниженими при нирковій недостатності макроамілаземії. Амілаза в сечі може залишатися підвищеною протягом 2 тижнів після нападу гострого панкреатиту і може передбачити утворення псевдокісти.
Клінічний діагноз повинен встановлюватися на основі інтеграції клінічних і лабораторних даних.