Принцип метода
Прямое определение липопротеидов высокой плотности не требует какой-либо предварительной обработки или центрифугирования. Анализ проводится в два этапа: ферментативный гидролиз и окисление (реакция Триндера).
- Гидролиз эфиров холестерина с помощью холестеролестеразы.
Эфир холестерина ХЭ → Холестерин + Жирные кислоты
Холестерин + О2 ХО → 4-холестенон + Н2О2
- Окисление 4-аминоантипирина под действием перекиси водорода и пероксидазы с образованием индикатора хинонимима.
2Н2О2 + HDAOS + 4-АА ПО → Хинониним + 4Н2О
Интенсивность окраски пропорциональна концентрации холестерина ЛПВП в образце.
Клиническое значение
Липопротеиды в крови осуществляют транспорт липидов, в том числе холестерола, от одной клеточной популяции в другую. В отличие от других липопротеидов, ЛПВП осуществляют транспорт холестерина от клеток периферических органов (в том числе сосудов сердца, артерий мозга и др.) в печень, где холестерол переводится в желчные кислоты и выводится из организма.
У женщин в среднем значение ЛПВП выше, чем у мужчин. Снижение концентрации ЛПВП холестерина, а также соотношение холестерина липопротеидов низкой плотности к липопротеидам высокой плотности более 3:1 связано с повышенным риском атеросклероза. Повышенный уровень ЛПВП-холестерола рассматривается как антиатерогенный фактор.
Клинический диагноз не должен основываться на одном показателе, необходимо учитывать клинические и другие лабораторные данные.
Состав набора
- Реагент 1. Буфер: N, N-бис (2-гидроксиэтил)-2-аминоэтансульфокислота - 100 mmol/l (ммоль/л); HDAOS – 0.7 mmol/l (ммоль/л); холестеринестераза ≥800 U/l (Ед/л); холестериноксидаза ≥500 U/l (Ед/л); каталаза ≥8300 KU/l (КОд/л); оксидаза аскорбиновой кислоты ≥3000 U/l (Ед/л).
- Реагент 2. Буфер: N, N-бис (2-гидроксиэтил) -2-аминоэтансульфокислота 100 mmol/l (ммоль/л); 4-аминоантипирин - 4 ммоль/л (ммоль/л); пероксидаза ≥ 30500 U/l (Ед/л).
- Инструкция по использованию.
- Сертификат качества.
Дополнительные реагенты
Стандарт Холестерина ЛПВП/ЛПНП поставляется отдельно. Рекомендуется использовать «СпЛ Калибратор Холестерина ЛПВП/ЛПНП», «СпЛ Мультикалибратор» производства ООО «ЛАБОРАТОРИЯ ГРАНУМ».
Аналитические характеристики
- Линейность измерительного диапазона: 0.1 – 3.87 mmol/l (ммоль/л). Отклонение от линейности не превышает 5%. Если полученные результаты были больше пределов линейности, разведите образцы 1:1 (в два раза) NaCl 9 g/l (г/л) и умножьте результат на 2.
- Чувствительность не менее 0.1 ммоль/л (ммоль/л).
- Коэффициент вариации результатов определений – не более 5%.
Материал для исследования
Сыворотка или плазма крови. В качестве антикоагулянта рекомендован гепарин или ЭДТА. Не использовать цитрат. Тестируемые сыворотки или плазмы должны быть тщательно отделены от форменных элементов крови не позднее, чем через 1 ч после взятия крови. Избегайте использования мутных, липидных и гемолитических образцов.
Стабильность образцов 7 d (сут) при 2-8 ºС или 3 mth (мес) при замораживании до -20 ºC.
Перечень необходимого оборудования
- спектрофотометрическое или колориметрическое оборудование с длиной волны 550-650 нм (нм).
- подходящие кюветы с толщиной оптического слоя 1 cm (см).
- термостатическая водяная баня с 37 ºC.
- общее лабораторное оборудование.
Прим: Адаптации к полуавтоматическим и автоматическим приборам предоставляются по запросу.
Подготовка реагентов
Перед использованием набор выдержать при комнатной температуре 30 мин (мин).
Р1 и Р2 готовы к использованию.
Условия измерения:
- длина волны 550-650 nm (нм)
- кювета с толщиной оптического слоя 1 cm (см)
- температура 37 ºC
Референтные величины
Основываясь на результатах исследований, проведенных лабораториями, рекомендуем пользоваться нижеприведенными нормами. Вместе с тем согласно правилам GLP (Хорошей лабораторной практики), каждая лаборатория должна сама определить для себя параметры нормы, характерные для обследуемой популяции.
| 1 | 2 | 3 |
|---|---|---|
| Риск | Мужчины | Женщины |
| Низкий, ммоль/л (ммоль/л) | > 1.295 | > 1.554 |
| Условный mmol/l (ммоль/л) | 0.9065 – 1.295 | 1.1655 –1.554 |
| Высокий, ммоль/л (ммоль/л) | <0.9065 | < 1.1655 |
Комплектация
| 1 | 2 | 3 |
|---|---|---|
| 4.008 | 4.009 | |
| Содержимое | 100 определ. | 200 определ. |
| Р1 | 1 х 30 мл (мл) | 1 х 60 мл (мл) |
| Р2 | 1 х 10 мл (мл) | 1 х 20 мл (мл) |