Принцип метода
Креатинкиназа (KK) катализирует реверсную перенос фосфатной группы от креатинфосфата к АДФ. Эта реакция связана с такими катализаторами как гексокиназа (ГК) и глюкозо-6-фосфат дегидрогеназы (Г6ФДГ):
Креатинфосфат+АДФ → Креатин+АТФ
АТФ+D-Глюкоза → АДФ+Г6Ф
Г6Ф+НАДФ+ → 6-Фосфоглюконат+НАДФ+H+
Скорость образования НАДФ пропорциональна каталитической активности КK, содержащейся в образце и измеряемой на фотометре.
Клиническое значение
Креатинкиназа – фермент, который широко распространен в тканях организма. Ее физиологическая роль связана с аденозинтрифосфатом (АТФ), снабжающим энергетический субстрат для мышечного сокращения.
Повышенные значения КK наблюдаются при заболеваниях мышечного скелета и после инфаркта миокарда.
Клинический диагноз не должен основываться только на одном показателе, необходимо учитывать клинические и другие лабораторные данные.
Состав набора
- Реагент 1. Буфер: Имидазол рН 6.7 – 125 mmol/l (ммоль/л); D-глюкоза – 25 mmol/l (ммоль/л); N-ацетилL-цистеин (NАС) – 25 mmol/l (ммоль/л); ацетат магнезии – 1.25 mmol/l (ммоль/л); НАДФ – 2.52 ммоль/л (ммоль/л); ЭДТА – 2.02 ммоль/л (ммоль/л); гексокиназа ≥ 6800 U/l (Ед/л).
- Реагент 2. Энзимы: АДФ – 15.2 mmol/l (ммоль/л); АМФ - 25 ммоль/л (ммоль/л); диаденозин-5-пентафосфат - 103 ммоль/л (ммоль/л), Г6Ф-ДГ ≥8 800 U/l (Ед/л); креатинфосфат – 250 mmol/l (ммоль/л).
- Инструкция по использованию.
- Сертификат качества.
Аналитические характеристики
- Линейность измерительного диапазона: 20 – 1000 U/l (Од/л). Отклонение от линейности не превышает 7%. Если полученные результаты были больше пределов линейности, разведите образцы 1:9 (в десять раз) NaCl 9 g/l (г/л) и умножьте результат на 10.
- Чувствительность не менее 20 U/l (Од/л).
- Коэффициент вариации результатов определений – не более 7%.
Материал для исследования
- Сыворотка или плазма крови (рекомендуется использовать гепарин, в качестве антикоагулянта). Тестируемые сыворотки или плазмы должны быть тщательно отделены от форменных элементов крови не позднее, чем через 1 ч после взятия крови. Избегайте использования мутных, липидных и гемолитических образцов.
Стабильность образцов 7 d (сут) при 2-8 ºC, в защищенном от света месте.
Активность креатинкиназы снижается на 10% после 1 d (сут) хранения при 2-8 ºC или после 1 ч (ч) при 15-25 ºC.
| 1 | 2 | 3 | 4 |
|---|---|---|---|
| 25 ºC | 30 ºC | 37 ºC | |
| Женщины в | 70 U/l (Ед/л) | 110 U/l (Ед/л) | 170 U/l (Ед/л) |
| Мужчины в | 80 U/l (Ед/л) | 130 U/l (Ед/л) | 195 U/l (Од/л) |
Перечень необходимого оборудования
- Cпектрофотометрическое или колориметрическое оборудование с длиной волны 340 nm (нм).
- подходящие кюветы с толщиной оптического слоя 1 cm (см).
- общее лабораторное оборудование.
Прим: Адаптации к полуавтоматическим и автоматическим приборам предоставляются по запросу
Подготовка реагентов
Перед использованием набор выдержать при комнатной температуре 30 мин (мин).
Приготовление рабочего реагента РР: смешать 4 объема Р1 и 1 объем Р2.
РР стабилен 2 wk (неделя) при 2-8 ºC или 48 h (ч) при 15-25 ºC.
Условия измерения:
- длина волны 340 nm (нм)
- кювета с толщиной оптического слоя 1 cm (см)
- температура 25 ºС / 30 ºС / 37 ºС
Референтные величины
Основываясь на результатах исследований, проведенных лабораториями, рекомендуем пользоваться нижеприведенными нормами. Вместе с тем согласно правилам GLP (Хорошей лабораторной практики), каждая лаборатория должна сама определить для себя параметры нормы, характерные для обследуемой популяции.
Комплектация
| 1 | 2 |
|---|---|
| 1.022 | |
| Содержание | 100 опред. |
| Р1 | 2 х 40 мл (мл) |
| Р2 | 2 х 10 мл (мл) |