Принцип метода
Креатинкиназа (КК) состоит из двух субъединиц: М (мышечная) и В (сердечная), из которых образуется 3 изофермента, которые по органной принадлежности делятся: на КК-ВВ-мозг, КК-МВ-сердечная мышца, скелетные для КК-ММ мышцы. КК-МВ состоит из двух субъединиц КК-М и КК-В.
Субъединицы М и В иммунологически разные. Данный тест включает измерение активности КК в присутствии антител к КК-М мономеру. Эти антитела полностью ингибируют активность КК-ММ и наполовину активность КК-МВ, не действуя на В-субъединицу, КК-МВ и КК-ВВ. Затем посредством метода на КФК определяется активность КК-В. Активность изофермента УК-МВ определяется умножением на 2 активности УК-В.
Клиническое значение
Креатинкиназа (КК) – фермент, осуществляющий превращение фосфокреатина с образованием креатина и АТФ, который необходим для мышечного сокращения. Общая активность креатинкиназы состоит из активности изоформ фермента: изоформа КК-ВВ в основном присутствует в тканях мозга, лёгких, в желудке; Изофермент КК-ММ характерен для мышечной ткани, а изоформа КК-МВ сконцентрирована в тканях сердца. При поражении сердечной мышцы эта изоформа выходит из клеток сердца в кровяное русло, что сопровождается увеличением активности изофермента в крови. Величина увеличения активности КК-МВ соответствует величине поражения сердечной мышцы при инфаркте миокарда, поэтому относится к ранним показателям поражения сердечной мышцы. Повышение активности начинается через 4-8 ч (ч) после инфаркта, достигает пика через 4-12 ч (ч). Срок нормализации активности может занимать 24 – 48 ч (час). Определение активности КК-МВ проводят одновременно с определением общей активности креатинкиназы. После этого рассчитывается соотношение в процентах, которое в норме должно быть не более 6%. При инфаркте активность КК-МВ колеблется от 6 до 25%. Некоторое увеличение активности КК-МВ может наблюдаться при гипотиреозе, заболеваниях мышц.
Клинический диагноз не должен основываться на одном показателе, необходимо учитывать клинические и другие лабораторные данные.
Состав набора
- Реагент 1. Буфер: мидазоловый буфер – 125 mmol/l (ммоль/л); D-глюкоза – 25 mmol/l (ммоль/л); N-ацетил-L-цистеин - 25 ммоль/л (ммоль/л); магния ацетат – 1.25 mmol/l (ммоль/л); НАДФ – 2.52 mmol/l (ммоль/л); ЭДТА – 2.02 mmol/l (ммоль/л); гексокиназа > 6800 U/l (Ед/л); антитела поликлональные к ККМ (овцы), ингибирующая способность до 2000 U/l (Ед/л) КК-ММ.
- Реагент 2. Энзимы: АДФ – 15.2 mmol/l (ммоль/л); АМФ - 25 ммоль/л (ммоль/л); 2-аденозин-5-пентафосфат - 103 ммоль/л (ммоль/л); глюкоза-6-фосфат дегидрогеназа ≥ 8800 U/l (Ед/л); креатин фосфат – 250 mmol/l (ммоль/л).
- Инструкция по использованию.
- Сертификат качества.
Аналитические характеристики
- Линейность измерительного диапазона: 5 – 600 U/l (Од/л). Отклонение от линейности не превышает 5%. Если полученные результаты были больше пределов линейности, разведите образцы 1:1 (в два раза) NaCl 9 g/l (г/л) и умножьте результат на два.
- Чувствительность не менее 5 U/l (Од/л).
- Коэффициент вариации результатов определений – не более 5%.
Материал для исследования
Сыворотка крови или гепаринизированная плазма. Тестируемые сыворотки или плазмы должны быть тщательно отделены от форменных элементов крови не позднее, чем через 1 ч после взятия крови. Избегайте использования мутных, липидных и гемолитических образцов.
Стабильность образцов 7 d (сут) при 2-8 ºС. Активность КK-MB уменьшается на 10% после 24 ч (ч) при 4 ºC или 1 ч (ч) при 25 ºC.
Перечень необходимого оборудования:
- cпектрофотометрическое или колориметрическое оборудование с длиной волны 340 nm (нм).
- подходящие кюветы с толщиной оптического слоя 1 cm (см).
- общее лабораторное оборудование.
Прим: Адаптации к полуавтоматическим и автоматическим приборам предоставляются по запросу
Подготовка реагентов
Перед использованием набор выдержать при комнатной температуре 30 мин (мин).
Приготовление рабочего реагента РР: смешать 4 объема Р1 и 1 объем Р2.
РР стабилен 2 wk (неделя) при 2-8 ºC или 24 h (ч) при комнатной температуре 15-25 ºC.
Условия измерения:
- длина волны 340 nm (нм)
- кювета с толщиной оптического слоя 1 cm (см)
- температура 25 ºС /30 ºС /37 ºC
Референтные величины
Основываясь на результатах исследований, проведенных лабораториями, рекомендуем пользоваться нижеприведенными нормами. Вместе с тем согласно правилам GLP (Хорошей лабораторной практики), каждая лаборатория должна сама определить для себя параметры нормы, характерные для обследуемой популяции.
Подозрение на повреждение миокарда состоит в трех следующих факторах:
| 1 | 2 | 3 | 4 |
|---|---|---|---|
| 25 ºС | 30 ºС | 37 ºС | |
| Креатинкиназа МВ | >10 U/l (Од/л) | >15 U/l (Од/л) | >24U/l (Од/л) |
| Креатинкиназа общая | |||
| мужчин к | 80 U/l (Ед/л) | 130 U/l (Ед/л) | 195 U/l (Од/л) |
| женщин к | 70 U/l (Ед/л) | 110 U/l (Ед/л) | 170 U/l (Ед/л) |
Комплектация
| 1 | 2 |
|---|---|
| 1.023 | |
| Содержимое | 75 определ. |
| Р1 | 2 х 30 мл (мл) |
| Р2 | 2 х 7.5 мл (мл) |