Щелочная фосфатаза расщепляет фенилфосфат с образованием фенола. Окислительное сочетание фенола с 4-аминофеназоном образует красный краситель, интенсивность окраски которого определяется фотометрически. Активность фермента пропорциональна приращению оптической плотности раствора.

Клиническое значение

Щелочная фосфатаза – фермент, присутствующий почти во всех тканях организма, особенно высокое содержание в костях, печени, плаценте, кишечнике и почках. Как увеличение, так и уменьшение ЛФ имеет большое клиническое значение.

Увеличение активности ЛФ главным образом встречается при заболеваниях костей (болезни Педжета, остеомалации, рахите) или заболеваниях печени (холестаз, обструктивное заболевание печени, гепатит, саркоидоз, гепатотоксические случаи, механической желтельницы), метастазирование в кости и печень.

Причины понижения ЛФ плазмы: кретинизм и дефицит витамина C, гипотириоз, остеопороз.

Клинический диагноз не должен основываться только на одном показателе, необходимо учитывать клинические и другие лабораторные данные.

Состав набора

Реагент 1. Буфер, концентрат: карбонат натрия, бикарбонат натрия, 4-аминофеназон.
Реагент 2. Субстрат: Динатрийфенилфосфат.
Реагент 3. Окислитель: период натрия.
Стандарт. Водный раствор фенола.
Инструкция по использованию
Сертификат качества.

Аналитические характеристики

Линейность измерительного диапазона: 100-10000 nmol/(sl) (нмоль/(секл)). Отклонение от линейности не превышает 7%. Если полученные результаты были больше, чем пределы линейности, разведите образцы NaCl 9 g/l (г/л) и умножьте результат на коэффициент разбавления.
Чувствительность не менее 100 nmol/(sl) (нмоль/(секл)).
Коэффициент вариации результатов определений – не более 7%.

Материал для исследования

Сыворотка крови. Тестируемые сыворотки должны быть тщательно отделены от форменных элементов крови не позднее, чем через 1 ч после взятия крови. Избегайте использования мутных, липидных и гемолитических образцов.

Перечень необходимого оборудования

Спектрофотометрическое или колориметрическое оборудование с длиной волны 540(490-550) nm(нм).
подходящие кюветы с толщиной оптического слоя 1 cm (см).
водяная баня.
общее лабораторное оборудование.

Прим: Адаптации к полуавтоматическим и автоматическим приборам предоставляются по запросу.

Подготовка реагентов

Перед использованием набор выдержать при комнатной температуре 30 мин (мин).

Буферный раствор. Содержимое флакона с Р1 развести в мерной колбе содержимым 500 ml (мл), довести до метки дистиллированной водой. Раствор устойчив при хранении 2-8 С в течение 1 mth (мес).
Субстратно-буферный раствор. Готовят смешиванием буферного раствора и Р2 Для жидкого субстрата: смешать в соотношении 49:1 Для сухого субстрата: на аналитических весах взвесить навеску 64 мг (mg) субстрата из флакона и растворить в 50 ml (мл) буферного раствора. Субстратно-буферный раствор приготовляют перед применением.
Окислитель. Содержимое флакона с Р3 растворить в мерной колбе содержимым 500 ml (мл), довести дистиллированной водой до метки. Раствор устойчив при хранении 2-8°С.
Стандарт. Из флакона отобрать 2,5 мл (мл) раствора фенола, перенести в мерную колбу содержимым 50 мл (мл), довести дистиллированной водой до метки. Раствор устойчив при хранении 2-8 С в течение 1 wk (неделя).

Можно смешивать кратные объемы реагентов без изменения их соотношения.

Условия измерения:

длина волны 540 (490-550) nm (нм)
кювета с толщиной оптического слоя 1 cm (см)
температура 37 ºC

Референтные величины

Основываясь на результатах исследований, проведенных лабораториями, рекомендуем пользоваться нижеприведенными нормами. Вместе с тем согласно правилам GLP (Хорошей лабораторной практики), каждая лаборатория должна сама определить для себя параметры нормы, характерные для обследуемой популяции.

Мужчины: 900-2290 nmol/(sl) (нмоль/(секл))
Женщины: 740-2100 nmol/(sl) (нмоль/(секл))

Комплектация