Принцип метода
Щелочная фосфатаза (ЛФ) катализирует гидролиз п-нитрофенилфосфата при рН 10.4, освобождение п-нитрофенола и фосфата, согласно следующей реакции:
п-нитрофенилфосфат + H2O → п-нитрофенол + фосфат
Скорость образования п-нитрофенола, пропорциональна каталитической активности щелочной фосфатазы, содержащейся в пробе и измеряемой на фотометре.
Клиническое значение
Щелочная фосфатаза – фермент, присутствующий почти во всех тканях организма, особенно высокое содержание в костях, печени, плаценте, кишечнике и почках. Как увеличение, так и уменьшение ЛФ имеет большое клиническое значение.
Увеличение активности ЛФ главным образом встречается при заболеваниях костей (болезни Педжета, остеомалации, рахите) или заболеваниях печени (холестаз, обструктивное заболевание печени, гепатит, саркоидоз, гепатотоксические случаи, механической желтельницы), метастазирование в кости и печень.
Причины понижения ЛФ плазмы: кретинизм и дефицит витамина C, гипотириоз, остеопороз.
Клинический диагноз не должен основываться только на одном показателе, необходимо учитывать клинические и другие лабораторные данные.
Состав набора
- Реагент 1. Буфер: диэтаноламин рН 10.4 – 1 mmol/l (ммоль/л); магния хлорид – 0.5 mmol/l (ммоль/л).
- Реагент 2. Субстрат: п-нитрофенилфосфат – 10 mmol/l (ммоль/л).
- Инструкция по использованию.
- Сертификат качества.
Аналитические характеристики
- Линейность измерительного диапазона: 20 – 1200 U/l (Од/л). Отклонение от линейности не превышает 5%. Если полученные результаты были больше пределов линейности, разведите образцы 1:9 (в 10 раз) NaCl 9 g/l (г/л) и умножьте результат на 10.
- Чувствительность не менее 20 U/l (Од/л).
- Коэффициент вариации результатов определений – не более 5%.
Материал для исследования
Сыворотка или плазма крови. Использовать гепарин в качестве антикоагулянта. Оксалаты, цитраты, фториды и ЭДТА ингибируют щелочную фосфатазу. Тестируемые сыворотки или плазмы должны быть тщательно отделены от форменных элементов крови не позднее, чем через 1 ч после взятия крови.
Избегайте использования мутных, липидных и гемолитических образцов. Стабильность образцов 3 d (сутки) при 2-8 ºC.
Перечень необходимого оборудования
- cпектрофотометрическое или колориметрическое оборудование с длиной волны 405 nm (нм).
- подходящие кюветы с толщиной оптического слоя 1 cm (см).
- общее лабораторное оборудование. Прим: Адаптации к полуавтоматическим и автоматическим приборам предоставляются по запросу.
Подготовка реагентов
Перед использованием набор выдержать при комнатной температуре 30 мин (мин).
Приготовление рабочего реагента РР: смешать 4 объема Р1 (буфер) и 1 объем Р2 (субстрат).
РР стабилен 1 mth (мес) при 2-8 ºC или 10 d (сут) при 15-25 ºC.
Условия измерения:
- длина волны 405 nm (нм) – кювета с толщиной оптического слоя 1 cm (см)
- температура 25 ºC / 30 ºC / 37 ºC
Референтные величины
Основываясь на результатах исследований, проведенных лабораториями, рекомендуем пользоваться нижеприведенными нормами. Вместе с тем согласно правилам GLP (Хорошей лабораторной практики), каждая лаборатория должна сама определить для себя параметры нормы, характерные для обследуемой популяции.
| 1 | 2 | 3 | 4 |
|---|---|---|---|
| 25 ºC | 30 ºC | 37 ºC | |
| Взрослые | 60-170 U/l (Ед/л) | 73-207 U/l (Ед/л) | 98-279 U/l (Ед/л) |
| Дети (1-14 лет) | < 400 U/l (Ед/л) | < 480 U/l (Ед/л) | < 645 U/l (Ед/л) |
Факторы, влияющие на активность ЛФ у людей:
- физические нагрузки
- период активного роста у детей – беременность.
Комплектация
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
|---|---|---|---|---|
| 1.038 | 1.032 | 1.033 | 1.034 | |
| Содержимое | 40 определ. | 80 определ. | 250 определ. | 415 определ. |
| Р1 | 1 х 40 мл (мл) | 1 х 80 мл (мл) | 1 х 240 мл (мл) | 1 х 400 мл (мл) |
| Р2 | 1 х 10 мл (мл) | 1 х 20 мл (мл) | 1 х 60 мл (мл) | 1 х 100 мл (мл) |