Кардіоліпіновий антиген для РМП (VDRL) з контролями

ПРИЗНАЧЕННЯ

Для лабораторної діагностики сифілісу. Для якісного та кількісного виявлення реагінових антитіл до Treponema pallidum в сироватці та плазмі крові людини в нетрепонемному тесті (VDRL, РМП).

ЗАГАЛЬНА ХАРАКТЕРИСТИКА

Набір містить кардіоліпіновий антиген і холін-хлорид на ізотонічному розчині натрію хлориду. Кардіоліпіновий антиген є суспензією в 10% розчині холін-хлориду трьох високоочищених ліпідів: кардіоліпіну, лецитину та холестерину в абсолютному етиловому спирті. Кардіоліпін представлений у вигляді натрієвої солі кардіоліпіну, отриманого шляхом багаторазових осаджень хлористим барієм спиртового екстракту ліпідів серцевого м‘яза великої рогатої худоби. Лецитин отриманий шляхом багаторазових осаджень хлористим кадмієм спиртового екстракту ліпідів курячих жовтків. Холестерин виготовлений з головного або спинного мозку сільськогосподарських тварин і має вигляд кристалічних часток.

ПРИНЦИП АНАЛІЗУ

У антигенних структурах Treponema pallidum є ліпопротеїнові антигени, у відповідь на які в організмі хворого формуються антитіла класу IgM і IgG (реагіни). Реагінові антитіла з'являються в сироватці нелікованих хворих через 2-3 тижні, а в спинномозковій рідини через 4-8 тижнів після зараження. Антигенний комплекс кардіоліпіну, лецитину і холестерину здатний зв'язуватися з реагінами, що і реєструється в реакції мікропреципітації (випадання пластівців різної величини).

СПЕЦИФІЧНА АКТИВНІСТЬ

При дослідженні плазми та сироватки крові від хворих на сифіліс з кардіоліпіновим антигеном повинна спостерігатися позитивна реакція у вигляді випадіння пластівців різної величини. При дослідженні сироватки/плазми крові від здорових осіб повинна спостерігатися опалесценція без формування агрегатів. ФОРМА ВИПУСКУ. Набір реагентів для діагностики in vitro. Набір розрахований на проведення 500 досліджень (включаючи контролі).

Реагенти в наборі:

• Кардіоліпіновий антиген 5 × 2 мл Розчин, що містить кардіоліпін (0,03%), лецитин (0,27%), холестерин (0,9%) в абсолютному етиловому спирті (прозорий безбарвний розчин з характерним запахом спирту. Допускається утворення кристалів холестерину на холоді, які розчиняються при температурі (37±1)°С.)
• Холін-хлорид 70% 1 × 5 мл Холін-хлорид в 0,9% розчині натрію хлориду (прозорий безбарвний розчин з характерним запахом)

НЕОБХІДНІ РЕАКТИВИ, МАТЕРІАЛИ ТА ОБЛАДНАННЯ

• Плазма або інактивована сироватка від хворих на сифіліс у якості позитивного контролю;
• Плазма або інактивована сироватка від здорових осіб у якості негативного контролю;
• 0,9% розчин натрію хлориду;
• Піпетки;
• Центрифуга лабораторна;
• Термостат, (37±1)°С;
• Скло або пластина з плексигласу;
• Холодильник побутовий, (2-8)°С;
• Таймер;
• Рукавички медичні одноразові;
• Контейнери для твердих і рідких потенційно інфекційних відходів.

ЗАХОДИ БЕЗПЕКИ

• Набір призначений для професійного використання.
• Набір призначений для діагностики «in vitro».
• З досліджуваними зразками необхідно поводитися як з потенційно інфекційним матеріалом.
• Не пипетуйте розчини ротом.
• При роботі з набором використовуйте спецодяг та одноразові гумові рукавички, а також ретельно мийте руки після роботи.
• Не допускайте проливання зразків та розчинів, що їх містять.
• Місця проливання зразків обробляйте 70-76% етиловим спиртом. Матеріали, за допомогою яких проводилась очистка, помістіть в контейнер для інфікованих відходів.
• Інструменти, обладнання та робочі поверхні обробляють 76% етиловим спиртом до та після роботи.
• Рідкі потенційно інфекційні відходи знезаражують дезінфікуючими засобами, дозволеними МОЗ для знезараження рідких відходів, згідно з інструкцією про їх використання.
• Тверді потенційно інфекційні відходи знезаражують автоклавуванням протягом 1 години при (124-128)°С під тиском 0,15 МПа (1,5 атм.).

ПРАВИЛА РОБОТИ

Достовірність результатів залежить від коректного виконання наступних правил:

• Не використовуйте набір після закінчення терміну придатності.
• Не змішуйте реагенти наборів різних серій.
• Не використовуйте реагенти з порушенням герметичності упаковки.
• Користуйтеся одноразовими піпетками і пробірками.
• Використовуйте новий наконечник для внесення кожного зразка.
• Уникайте попадання прямого світла на робочу поверхню під час проведення аналізу.
• Не використовуйте пластикові флакони для зберігання антигенної емульсії через сорбцію антигену на стінках флакону.
• Не змінюйте процедуру аналізу.

УТИЛІЗАЦІЯ ВІДХОДІВ

• Після використання набору рідкі та тверді потенційно інфекційні відходи підлягають знезараженню згідно розділу «Заходи безпеки».
• Невикористані набори перед утилізацією розкомплектувати та утилізувати як побутові відходи.
• Поводження з відходами, для утилізації та переробки яких в Україні існують відповідні технології та виробничо-технологічні і/або економічні передумови, регламентується чинним законодавством України.

ПІДГОТОВКА ЗРАЗКІВ

Реакцію проводять з плазмою або інактивованою сироваткою, отриманими стандартними методами.

Взяття крові з пальця

У пробірку за допомогою капіляра апарата Панченкова вносять 5% розчин натрію лимоннокислого до мітки «50». Тим самим капіляром двічі набирають кров з пальця до мітки «0» та вносять у пробірку з розчином натрію лимоннокислого, перемішують вміст пробірки та центрифугують (якщо необхідно провести дослідження відразу після взяття крові) при 1000-2000 об/хв протягом 15 хвилин. Отриману плазму використовують у дослідженні. Не інактивують.

Взяття крові з вени

Кров з вени беруть в об’ємі 5-10 мл, відокремлюють її від згустку, інактивують при температурі (56±1)°С протягом (30±1) хвилин і використовують у дослідженні. Досліджувані зразки можуть зберігатися не більше трьох діб при температурі (2-8)°С. Допускається тривале зберігання зразків в замороженому стані при температурі мінус 20°С і нижче. Повторне заморожування розморожених зразків не допускається. Зразки, які містять агрегати та осад, перед аналізом освітлюють центрифугуванням. Не придатні для аналізу зразки з гемолізом, гіперліпідемією або бактеріальним проростанням.

ПІДГОТОВКА РЕАГЕНТІВ

Оскільки реагенти закриті гумовими пробками, для відбору реагенту рекомендується використовувати ін’єкційні (інсулінові) шприці. Кожний реагент відбирають окремим шприцем.

Розчин холін-хлориду 10%

Розведіть необхідну для аналізу кількість 70% холін-хлориду до 10% концентрації 0,9% розчином натрію хлориду в співвідношенні 1:6.

Антигенна емульсія

Перевірте прозорість кардіоліпінового антигену у флаконі. При наявності кристалів холестерину розчиніть їх нагріванням флаконів в термостаті при температурі (37±1)°С. До певного об‘єму 0,9% розчину натрію хлориду додайте рівний об’єм кардіоліпінового антигену. Перемішайте суміш і залиште на 30 хвилин при температурі (20±2)°С, після чого центрифугуйте при 3000 об/хв протягом 15 хвилин. Надосадову рідину злийте. До осаду додайте 3,5 об‘єму (відносно взятого антигену) 10% розчину холін-хлориду. Ретельно перемішайте. Зберігання: антигенна емульсія стабільна протягом 6 діб при температурі (2-8)°С при зберіганні в щільно закритій скляній ємності в темноті.

ЗБЕРІГАННЯ РЕАГЕНТІВ ПІСЛЯ ПЕРШОГО РОЗКРИТТЯ УПАКОВКИ

Невикористані реагенти зберігати в щільно закритій первинній упаковці в захищеному від світла місці при температурі (2-8)°С впродовж терміну придатності набору.

ПРОВЕДЕННЯ АНАЛІЗУ

Оптимальна температура проведення аналізу – (18-25)°С.

Якісний метод

Нанесіть окремо по 3 краплі (1 крапля 50 мкл) досліджуваних зразків, позитивної сироватки/плазми, негативної сироватки/плазми або 0,9% розчину натрію хлориду в якості негативного контролю у заглиблення пластинки з плексигласу або на скло.

Додайте по 1 краплі (1 крапля 50 мкл) антигенної емульсії. Перемішайте, обережно потрушуючи пластину, протягом 5 хв. Додайте в кожну лунку по 3 краплі (1 крапля 50 мкл) 0,9% розчину натрію хлориду, перемішайте, обережно потрушуючи пластину, і залиште на 5 хв при температурі (18-25)°С. При отриманні сумнівного результату (не чітко виражений преципітат) рекомендується продовжити перемішування компонентів реакції ще 5 хв. Враховуйте результати лише після появи пластівців у позитивній сироватці/плазмі, але не пізніше 10 хвилин після змішування реагентів. Контроль антигенної емульсії з позитивною сироваткою/плазмою та негативною сироваткою/плазмою або з 0,9% розчином натрію хлориду повинен проводитися кожен раз в день тестування.

ОБЛІК РЕЗУЛЬТАТІВ

Результати реакції враховують візуально на темному фоні. При дослідженні плазми/сироватки крові від хворих на сифіліс спостерігається позитивна реакція у вигляді випадання пластівців різного розміру, що оцінюється у хрестах (великі (++++) і середні (+++) з чітким просвітленням рідини – позитивна реакція, дрібні (++) – слабкопозитивна реакція). При дослідженні плазми або сироватки від здорових осіб спостерігається негативна реакція у вигляді опалесценції. Результати реакції дійсні, якщо в позитивній сироватці/плазмі спостерігається позитивна реакція, а в негативній сироватці/плазмі або 0,9% розчині натрію хлориду – негативна реакція. Кількісний метод (визначення титру реагінів) Титр реагінів визначається лише в зразках, які дали позитивну або слабопозитивну реакцію. Розведіть досліджуваний зразок послідовно 0,9% розчином натрію хлориду в співвідношенні 1:1, 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32. Досліджуйте кожне розведення як описано для якісного методу. Титром реагинів в досліджуваному зразку вважати максимальне його розведення, з яким спостерігається позитивна реакція за умови негативної реакції з наступним розведенням. Якщо позитивна реакція отримана з максимальним розведенням зразка, для визначення титру реагинів ряд розведень необхідно продовжити і дослідження повторити.

ВХІДНИЙ КОНТРОЛЬ ЯКОСТІ

Усі компоненти набору кожної серії належним чином контролюються на підприємстві-виробнику. Однак, кожна лабораторія, що використовує даний набір, може за необхідності проводити вхідний контроль якості серії набору. Вхідний контроль здійснюють відповідно до цієї інструкції з використанням позитивної та негативної сироватки/плазми або 0,9% розчину натрію хлориду в якості негативного контролю. Наявність преципітатів в реакції з позитивною сироваткою/плазмою крові та відсутність преципітації в реакції з негативною сироваткою/плазмою крові або 0,9% розчином натрію хлориду свідчить про придатність досліджуваної серії Набору реагентів для РМП. У разі отримання результатів вхідного контролю, які не відповідають вищевказаним вимогам, серія Набору реагентів для РМП не може бути використана в лабораторній діагностиці, про що необхідно повідомити підприємству-виробнику.

ОБМЕЖЕННЯ ТЕСТУ

Нетрепонемні тесті не є суворо специфічними тестами на сифіліс, оскільки проводяться з використанням кардіоліпінового антигену, антитіла до якого можуть з'являтися в організмі при серцево-судинній патології. У сироватці крові людей реагінові антитіла можуть транзиторно виявлятися при системних ураженнях паренхиматозних органів (печінки, нирок, легенів), гострих вірусних інфекціях, включаючи гепатит, вітряну віспу і кір, при малярії, після вакцинації і під час вагітності. Хронічна персистенція реагінових антитіл спостерігається при захворюваннях сполучної тканини, лепрі, онкологічних захворюваннях, застосуванні внутрішньовенних наркотиків. Кількість хибнопозитивних результатів збільшується при дослідженні зразків крові літніх людей. До хибнонегативних результатів може призвести недотримання процедури аналізу, встановленої виробником.

ЗБЕРІГАННЯ І ТРАНСПОРТУВАННЯ

Набір зберігають і транспортують в захищеному від світла місці за температури (2-8)C. Не заморожувати. Дозволяється транспортування за температури (9-25)ºС протягом десяти діб.

ТЕРМІН ПРИДАТНОСТІ. 1 рік.