Кардиолипиновый антиген для РМП (VDRL) с контролями

НАЗНАЧЕНИЕ

Для лабораторной диагностики сифилиса. Для качественного и количественного выявления реагиновых антител к Treponema pallidum в сыворотке и плазме крови человека в нетрепонемном тесте (VDRL, РМП).

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА

Набор содержит кардиолипиновый антиген и холин-хлорид на изотоническом растворе натрия хлорида. Кардиолипиновый антиген представляет собой суспензию в 10% растворе холин-хлорида трех высокоочищенных липидов: кардиолипина, лецитина и холестерина в абсолютном этиловом спирте. Кардиолипин представлен в виде натриевой соли кардиолипина, полученного путем многократных осаждений хлористым барием спиртового экстракта липидов сердечной мышцы крупного рогатого скота. Лецитин получен путем многократных осаждений хлористым кадмием спиртового экстракта липидов куриных желтков. Холестерин изготовлен из головного или спинного мозга сельскохозяйственных животных и имеет вид кристаллических частиц.

ПРИНЦИП АНАЛИЗА

В антигенных структурах Treponema pallidum имеются липопротеиновые антигены, в ответ на которые в организме больного формируются антитела класса IgM и IgG (реагины). Реагиновые антитела появляются в сыворотке нелеченных больных через 2-3 недели, а в спинномозговой жидкости через 4-8 недель после заражения. Антигенный комплекс кардиолипина, лецитина и холестерина способен связываться с реагинами, что и регистрируется в реакции микропреципитации (выпадение хлопьев различной величины).

СПЕЦИФИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ

При исследовании плазмы и сыворотки крови от больных сифилисом с кардиолипиновым антигеном должна наблюдаться положительная реакция в виде выпадения хлопьев различной величины. При исследовании сыворотки/плазмы крови от здоровых лиц должна наблюдаться опалесценция без формирования агрегатов. ФОРМА ВЫПУСКА. Набор реагентов для диагностики in vitro. Набор рассчитан на проведение 500 исследований (включая контроли).

Реагенты в наборе:

• Кардиолипиновый антиген 5 × 2 мл Раствор, содержащий кардиолипин (0,03%), лецитин (0,27%), холестерин (0,9%) в абсолютном этиловом спирте (прозрачный бесцветный раствор с характерным запахом спирта. Допускается образование кристаллов холестерина на холоде, которые растворяются при температуре (37±1)°С.)
• Холин-хлорид 70% 1 × 5 мл Холин-хлорид в 0,9% растворе натрия хлорида (прозрачный бесцветный раствор с характерным запахом)

НЕОБХОДИМЫЕ РЕАКТИВЫ, МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ

• Плазма или инактивированная сыворотка от больных сифилисом в качестве положительного контроля;
• Плазма или инактивированная сыворотка от здоровых лиц в качестве отрицательного контроля;
• 0,9% раствор натрия хлорида;
• Пипетки;
• Центрифуга лабораторная;
• Термостат, (37±1)°С;
• Стекло или пластина из плексигласа;
• Холодильник бытовой, (2-8)°С;
• Таймер;
• Перчатки медицинские одноразовые; Перчатки медицинские одноразовые;
• Контейнеры для твердых и жидких потенциально инфекционных отходов.

МЕРЫ БЕЗОПАСНОСТИ

• Набор предназначен для профессионального использования.
• Набор предназначен для диагностики "in vitro".
• С исследуемыми образцами необходимо обращаться как с потенциально инфекционным материалом.
• Не пипетируйте растворы ртом.
• При работе с набором используйте спецодежду и одноразовые резиновые перчатки, а также тщательно мойте руки после работы.
• Не допускайте проливания образцов и растворов, которые их содержат.
• Места проливания образцов обрабатывайте 70-76% этиловым спиртом. Материалы, с помощью которых проводилась очистка, поместите в контейнер для инфицированных отходов.
• Инструменты, оборудование и рабочие поверхности обрабатывают 76% этиловым спиртом до и после работы.
• Жидкие потенциально инфекционные отходы обеззараживают дезинфицирующими средствами, разрешенными Минздравом для обеззараживания жидких отходов, согласно инструкции об их использовании.
• Твердые потенциально инфекционные отходы обеззараживают автоклавированием в течение 1 часа при (124-128)°С под давлением 0,15 МПа (1,5 атм.).

ПРАВИЛА РАБОТЫ

Достоверность результатов зависит от корректного выполнения следующих правил:

• Не используйте набор после окончания срока годности.
• Не смешивайте реагенты наборов разных серий.
• Не используйте реагенты с нарушением герметичности упаковки.
• Пользуйтесь одноразовыми пипетками и пробирками.
• Используйте новый наконечник для внесения каждого образца.
• Избегайте попадания прямого света на рабочую поверхность во время проведения анализа.
• Не используйте пластиковые флаконы для хранения антигенной эмульсии из-за сорбции антигена на стенках флакона.
• Не изменяйте процедуру анализа.

УТИЛИЗАЦИЯ ОТХОДОВ

• После использования набора жидкие и твердые потенциально инфекционные отходы подлежат обеззараживанию согласно разделу "Меры безопасности".
• Неиспользованные наборы перед утилизацией раскомплектовать и утилизировать как бытовые отходы.
• Обращение с отходами, для утилизации и переработки которых в Украине существуют соответствующие технологии и производственно-технологические и/или экономические предпосылки, регламентируется действующим законодательством Украины.

ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ

Реакцию проводят с плазмой или инактивированной сывороткой, полученными стандартными методами.

Взятие крови из пальца

В пробирку с помощью капилляра аппарата Панченкова вносят 5% раствор натрия лимоннокислого до метки "50". Тем же капилляром дважды набирают кровь из пальца до метки "0" и вносят в пробирку с раствором натрия лимоннокислого, перемешивают содержимое пробирки и центрифугируют (если необходимо провести исследование сразу после взятия крови) при 1000-2000 об/мин в течение 15 минут. Полученную плазму используют в исследовании. Не инактивируют.

Взятие крови из вены

Кровь из вены берут в объеме 5-10 мл, отделяют ее от сгустка, инактивируют при температуре (56±1)°С в течение (30±1) минут и используют в исследовании. Исследуемые образцы могут храниться не более трех суток при температуре (2-8)°С. Допускается длительное хранение образцов в замороженном состоянии при температуре минус 20°С и ниже. Повторное замораживание размороженных образцов не допускается. Образцы, содержащие агрегаты и осадок, перед анализом осветляют центрифугированием. Не пригодны для анализа образцы с гемолизом, гиперлипидемией или бактериальным прорастанием.

ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ

Поскольку реагенты закрыты резиновыми пробками, для отбора реагента рекомендуется использовать инъекционные (инсулиновые) шприцы. Каждый реагент отбирают отдельным шприцем.

Раствор холин-хлорида 10%

Разведите необходимое для анализа количество 70% холин-хлорида до 10% концентрации 0,9% раствором натрия хлорида в соотношении 1:6.

Антигенная эмульсия

Проверьте прозрачность кардиолипинового антигена во флаконе. При наличии кристаллов холестерина растворите их нагреванием флаконов в термостате при температуре (37±1)°С. К определенному объему 0,9% раствора натрия хлорида добавьте равный объем кардиолипинового антигена. Перемешайте смесь и оставьте на 30 минут при температуре (20±2)°С, после чего центрифугируйте при 3000 об/мин в течение 15 минут. Надосадочную жидкость слейте. К осадку добавьте 3,5 объема (относительно взятого антигена) 10% раствора холин-хлорида. Тщательно перемешайте. Хранение: антигенная эмульсия стабильна в течение 6 суток при температуре (2-8)°С при хранении в плотно закрытой стеклянной емкости в темноте.

ХРАНЕНИЕ РЕАГЕНТОВ ПОСЛЕ ПЕРВОГО ВСКРЫТИЯ УПАКОВКИ

Неиспользованные реагенты хранить в плотно закрытой первичной упаковке в защищенном от света месте при температуре (2-8)°С в течение срока годности набора.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

Оптимальная температура проведения анализа - (18-25)°С.

Качественный метод

Нанесите отдельно по 3 капли (1 капля 50 мкл) исследуемых образцов, положительной сыворотки/плазмы, отрицательной сыворотки/плазмы или 0,9% раствора натрия хлорида в качестве отрицательного контроля в углубление пластинки из плексигласа или на стекло.

Добавьте по 1 капле (1 капля 50 мкл) антигенной эмульсии. Перемешайте, осторожно потряхивая пластину, в течение 5 мин. Добавьте в каждую лунку по 3 капли (1 капля 50 мкл) 0,9% раствора натрия хлорида, перемешайте, осторожно потряхивая пластину, и оставьте на 5 мин при температуре (18-25)°С. При получении сомнительного результата (не четко выраженный преципитат) рекомендуется продолжить перемешивание компонентов реакции еще 5 мин. Учитывайте результаты только после появления хлопьев в положительной сыворотке/плазме, но не позднее 10 минут после смешивания реагентов. Контроль антигенной эмульсии с положительной сывороткой/плазмой и отрицательной сывороткой/плазмой или с 0,9% раствором натрия хлорида должен проводиться каждый раз в день тестирования.

УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ

Результаты реакции учитывают визуально на темном фоне. При исследовании плазмы/сыворотки крови от больных сифилисом наблюдается положительная реакция в виде выпадения хлопьев разного размера, что оценивается в крестах (большие (++++) и средние (+++) с четким просветлением жидкости - положительная реакция, мелкие (++) - слабоположительная реакция). При исследовании плазмы или сыворотки от здоровых лиц наблюдается отрицательная реакция в виде опалесценции. Результаты реакции действительны, если в положительной сыворотке/плазме наблюдается положительная реакция, а в отрицательной сыворотке/плазме или 0,9% растворе натрия хлорида - отрицательная реакция. Количественный метод (определение титра реагинов) Титр реагинов определяется только в образцах, которые дали положительную или слабоположительную реакцию. Разведите исследуемый образец последовательно 0,9% раствором натрия хлорида в соотношении 1:1, 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32. Исследуйте каждое разведение как описано для качественного метода. Титром реагинов в исследуемом образце считать максимальное его разведение, с которым наблюдается положительная реакция при условии отрицательной реакции с последующим разведением. Если положительная реакция получена с максимальным разведением образца, для определения титра реагинов ряд разведений необходимо продолжить и исследование повторить.

ВХОДНОЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА

Все компоненты набора каждой серии должным образом контролируются на предприятии-изготовителе. Однако, каждая лаборатория, использующая данный набор, может при необходимости проводить входной контроль качества серии набора. Входной контроль осуществляют в соответствии с этой инструкцией с использованием положительной и отрицательной сыворотки/плазмы или 0,9% раствора натрия хлорида в качестве отрицательного контроля. Наличие преципитатов в реакции с положительной сывороткой/плазмой крови и отсутствие преципитации в реакции с отрицательной сывороткой/плазмой крови или 0,9% раствором натрия хлорида свидетельствует о пригодности исследуемой серии Набора реагентов для РМП. В случае получения результатов входного контроля, которые не соответствуют вышеуказанным требованиям, серия Набора реагентов для РМП не может быть использована в лабораторной диагностике, о чем необходимо сообщить предприятию-производителю.

ОГРАНИЧЕНИЯ ТЕСТА

Нетрепонемные тесты не являются строго специфическими тестами на сифилис, поскольку проводятся с использованием кардиолипинового антигена, антитела к которому могут появляться в организме при сердечно-сосудистой патологии. В сыворотке крови людей реагиновые антитела могут транзиторно выявляться при системных поражениях паренхиматозных органов (печени, почек, легких), острых вирусных инфекциях, включая гепатит, ветряную оспу и корь, при малярии, после вакцинации и во время беременности. Хроническая персистенция реагиновых антител наблюдается при заболеваниях соединительной ткани, лепре, онкологических заболеваниях, применении внутривенных наркотиков. Количество ложноположительных результатов увеличивается при исследовании образцов крови пожилых людей. К ложноотрицательным результатам может привести несоблюдение процедуры анализа, установленной производителем.

ХРАНЕНИЕ И ТРАНСПОРТИРОВКА

Набор хранят и транспортируют в защищенном от света месте при температуре (2-8)град.C. Не замораживать. Разрешается транспортировка при температуре (9-25)ºС в течение десяти суток.

СРОК ПРИГОДНОСТИ 1 год.