Принцип методу
Глюкозооксидаза (ГОД, GOD) каталізує окислення глюкози до глюконової кислоти. Утворений пероксид водню (H2O2) реагує з фенолом та 4-амінофеназоном (4-АP) в присутності пероксидази (ПОД, POD) і утворює хіноновий комплекс червоного кольору.
β-D-люкоза + О 2 + H2O ГОД→ Глюконова кислота + H2O2
H2O2 + Фенол + 4-АP ПОД→ Хінон + H2O
Інтенсивність забарвлення комплексу пропорційна концентрації глюкози в зразку.
Клінічне значення
Глюкоза є основним джерелом енергії для більшості клітин організму. Інсулін сприяє надходженню глюкози в клітини. Гіперглікемія є показником захворювання на діабет. У пацієнтів хворих на діабет виникають деякі проблеми з синтезом інсуліну.
Клінічний діагноз не повинен базуватися тільки на одному показникові, необхідно враховувати клінічні та інші лабораторні дані.
Склад набору
- Реагент 1. Буфер: трис рН 7.4 - 92 mmol/l (ммоль/л); фенол – 0.3 mmol/l (ммоль/л); глюкозооксидаза - 1500 U/l (Од/л); пероксидаза - 1000 U/l (Од/л); 4-амінофеназон – 2.6 mmol/l (ммоль/л).
- Стандарт. Водний розчин глюкози. Точна концентрація вказана в сертифікаті якості.
- Антикоагулянт 25х. Натрій хлористий - 4.2 g/l (г/л), натрій фтористий – 0.11 g/l (г/л), ЄДТА – 0.2 g/l (г/л)
- Інструкція з використання.
- Сертифікат якості.
Аналітичні характеристики
- Лінійність вимірювального діапазону: 1 - 30 mmol/l (ммоль/л). Відхилення від лінійності не перевищує 5%. Якщо отримані результати були більше, ніж межі лінійності, розведіть зразки 1:1 (в два рази) NaCl 9 g/l (г/л) та помножте результат на 2.
- Чутливість не менш 1 mmol/l (ммоль/л).
- Коефіцієнт варіації результатів визначень – не більш 5%.
Матеріал для дослідження
- Сироватка, плазма крові. Досліджувані сироватки або плазми повинні бути ретельно відокремлені від формених елементів крові не пізніше, ніж через 1 h (год) після взяття крові.
- Венозна або капілярна кров. Використовуйте антикоагулянти такі, як гепарин або оксалат натрію.
- Сеча випадкова або добова. Якщо припустима концентрація глюкози у зразку сечі виходить за межі вимірювального діапазону, треба розвести наданий зразок, використовуючи фізіологічний розчин, та отриманий результат помножити на коефіцієнт розведення.
- Спинномозкова рідина. Щоб уникнути гліколізу, визначати вміст глюкози потрібно не пізніше ніж через 3-4 години після пункції.
Прим: Уникайте використання мутних, ліпідних та гемолітичних зразків. Зразки стабільні протягом 3 d (доб) при 2-8 ºC, якщо вони були приготовлені не пізніше 30 min (хв) після забору крові.
Перелік необхідного устаткування
- Спектрофотометричне або колориметричне обладнання з довжиною хвилі 505 nm (нм).
- Відповідні кювети з товщиною оптичного шару 1 cm (см).
- Загальне лабораторне обладнання.
Прим: Адаптації до напівавтоматичних і автоматичних приладів надаються за запитом.
Підготовка реагентів
Перед використанням набір витримати при кімнатній температурі протягом 30 min (хв).
Р1 і Стандарт готові до використання.
Антикоагулянт. Розчиніть концентрат антикоагулянту у 25 разів дистильованою водою (1 частина антикоагулянту + 24 частини дистильованої води). Готовий розчин стійкий протягом 1 mth (міс).
Умови вимірювання:
- довжина хвилі 505 (490-550) nm (нм)
- кювета з товщиною оптичного шару 1 cm (см)
- температура 37 ºC/ 15-25 ºC
Референтні величини
Ґрунтуючись на результатах досліджень, проведених лабораторіями, рекомендуємо користуватися нормами, приведеними нижче. Разом з тим, відповідно до правил GLP (Гарної лабораторної практики), кожна лабораторія повинна сама визначити для себе параметри норми, характерні для обстежуваної популяції.
Нормальні рівні глюкози становлять:
- в сироватці, плазмі крові 3.33 - 6.1 mmol/l (ммоль/л)
- в капілярній (венозній) крові 2.7 - 5.7 mmol/l (ммоль/л)
- в сечі випадковій 0 - 1.11 mmol/l (ммоль/л)
- в сечі добовій 0 - 2.78 mmol/l (ммоль/л)
- в спинномозковій рідині 2.25 - 4.44 mmol/l (ммоль/л)
Комплектація
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
|---|---|---|---|---|---|
| 2.007 | 2.008 | 2.009 | 2.010 | 2.011 | |
| Вміст | 100 визн. | 200 визн. | 500 визн. | 1000 визн. | 2000 визн. |
| Р1 | 1 х 100 ml (мл) | 1 х 200 ml (мл) | 1 х 500 ml (мл) | 2 х 500 ml (мл) | 4 х 500 ml (мл) |
| Стандарт | 1 х 3 ml (мл) | 1 х 3 ml (мл) | 1 х 6 ml (мл) | 1 х 12 ml (мл) | 2 х 12 ml (мл) |
| Антикоагулянт | 1 х 20 ml (мл) | 1 х 20 ml (мл) | 1 х 20 ml (мл) | 1 х 40 ml (мл) | 1 х 40 ml (мл) |