Набір застосовується для визначення активності аспартатамінотрансферази (АсАТ) у сироватці крові та плазмі людини кінетичним методом в клініко-діагностичних і біохімічних лабораторіях і науково-дослідницькій практиці.
- Діапазон визначаємих активностей - від 4 МОд/л до 700 МОд/л.
- Лінійність методу повинна зберігатися до швидкості зміни оптичної щільності (ΔЕ/хв) 0,16 для хвиль Hg 334 нм, 340 нм або 0,08 для Hg 365 нм
- Коефіцієнт варіації визначення- не більше 5 %
- Чутливість 7 на 0,001 од. оптичної щільності за 1 хв – не більше 3,5 МОд/л (365 нм).
- Зберігання набору - при температурі від плюс 2 °С до плюс 8 °С.
- Гарантійний термін придатності набору - 12 місяців від дня виготовлення.
- Набір призначений для застосування in vitro тільки кваліфікованим лабораторним персоналом.
ПРИНЦИП МЕТОДУ
АсАТ каталізує перенос аміно-групи від L-аспартату до α-оксоглютарату в результаті чого утворюються оксалацетат та L-глютамат. Отриманий оксалацетат під час спряженої реакції, що каталізується малат-дегідрогеназою (MDН) вступає в реакцію з NADH, в присутності іонів водню. Продуктами цієї реакції є L-малат та NAD+.
Перетворення NADH в NAD+ супроводжується зміною в спектрі поглинання на довжині хвилі 340 або 334 або 365нм, при цьому зменшення оптичної щільності (ОЩ) розчину прямо пропорційне активності АсАТ в дослідній пробі. До складу реагенту входить також лактат-дегідрогеназа (LDH), що необхідна для попередження впливу пірувату, який зазвичай міститься в невеликих кількостях в пробах, на результат аналізу.
СКЛАД НАБОРУ
- Буферно-субстратний розчин АсАТ
- ТРІС буфер (80,0 ± 4,0) ммоль/л,
- L- аспарагінова кислота (0,240 ± 0,012) моль/л,
- Коензим-ензимний реагент
- 2-оксоглутарова кислота (12,0 ± 0,6) ммоль/л
- NADH (0,180 ± 0,009) ммоль/л
- лактатдегідрогеназа (LDH) 800 МОд/л
- малатдегідрогеназа (MDН) 600 МОд/л
ОБЛАДНАННЯ
-
Фотометричне обладнання, яке здатне вимірювати оптичну щільність розчинів при довжині хвилі 334, 340 або 365 нм в діапазоні (0-1,0) од. опт. щільності та довжині оптичного шляху 10 мм. (Можливo використання автоматичного аналізатора. Інструкція для автоматичного аналізатора висилається за замовленням споживача.)
-
Водяний термостат або автоматична водяна баня, які здатні підтримувати температуру плюс (37 ± 0,5)°С.
-
Піпетки місткістю 1, 0.1 та 5 мл (ДСТУ EN ISO 835:2018).
ЗРАЗОК
Сироватка. Матеріал стабільний протягом 3 діб при температурі від плюс 2 оС до плюс 8 оС. Якщо зберігати сироватку при кімнатній температурі, активність ферментів знижується. Активність ферменту в сироватці знижується після 3 діб зберігання при температурі від плюс 18 °С до плюс 25 °С - на 10%. УНИКАТИ ГЕМОЛІЗУ!
Плазма. Гепаринізована або ЭДТО-плазма.
ПРИГОТУВАННЯ РОБОЧИХ РОЗЧИНІВ
Робочий розчин: зігрійте до кімнатної температури та змішайте необхідні кількості Буферно-субстратного розчину АсАТ i Коензим-ензимного реагенту в співвідношенні 4:1 не менш, як за 20 хвилин до проведення аналізу у темному скляному флаконі. Ретельно закривайте флакони безпосередньо після кожного використання реактивів. Розчини світлочутливі. Не заморожувати. Робочий розчин стійкий не менше 4 тижнів при температурі зберігання від плюс 2 °С до плюс 8 °С, 72 годин - від плюс 20 °С до плюс 25°С. Мінімальна екстинція Робочого розчину проти води при 340 нм - 1,6 од. опт. щільності.
ПРОВЕДЕННЯ АНАЛІЗУ
Витрату реактивів можна масштабувати, відповідно до аспіраційного об'єму кювети аналізатора, виходячи з постійного співвідношення: Робочий розчин : Аналізуємий розчин = 10 : 1 (напр. 1 мл Робочого розчину + 0,1 мл сироватки). Витримати Робочий розчин до вибраної температури проведення аналізу 3 хв (для 1 мл, якщо більше, то 5 хв) у кюветі. Введіть аналізуємий матеріал в Робочий розчин, ретельно перемішайте та через 1 хв зчитуйте екстинцію (Е1) по відношенню до повітря. Потім зчитуйте екстинцію (Е2) ще через 3 хв по відношенню до повітря. Розрахуйте середнє змінення екстинції за 1 хв. (∆Е/хв)
КОНТРОЛЬ ЯКОСТІ
Для контролю ходу реакції і процедури вимірювання рекомендується використовувати контрольні сироватки із значеннями, визначеними даним методом. Наприклад: Diacon N, Diacon P (Австрія), TruLab N, TruLab P (Німеччина), ”ФілоНорм” або „ФілоПат” (Україна). Якщо значення контролю виходять за межі встановленого діапазону, перевірте обладнання, реактиви та можливі технічні проблеми. Кожна лабораторія повинна встановити власну внутрішню систему контролю якості та коригуючі дії, якщо контроль не відповідає допустимим нормам.
ДІАГНОСТИЧНІ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Амінотрансферази каталізують утворення глютамінової кислоти з 2-оксиглютарата шляхом
перенесення аміногруп.
У нормі АсАТ присутня в багатьох тканинах, але найбільші концентрації визначаються в
печінці, серцевих м'язах, а також в нирках і підшлунковій залозі.
Рівень сироваткової АсАТ підвищується при гепатиті та інших захворюваннях печінки, що
супроводжуються некрозом гепатоцитів: інфекційному мононуклеозі, холестазі, цирозі,
метастатичній карциномі печінки, білій лихоманці і при призначенні різних лікарських засобів,
таких як опіати, саліцілати або ампіцилін, після інфаркта міокарду, при важкій коронарній
недостатності, після нападів параксизмальної тахікардії, при захворюваннях скелетних м'язів
(наприклад, що прогресує мускульна дистрофія), при гострому панкриотиті та інших
захворюваннях.
Оскільки печінковий специфічний фермент АлАТ значно підвищений лише при
гепатобіліарних захворюваннях, то підвищення рівня АсАТ може статися в наслідок пошкодження
серцевих або скелетних м’язів, а також паренхіми печінки. Таким чином, застосовують паралельне
вимірювання АлАТ та АсАТ, щоб відрізнити пошкодження печінки від пошкодження серцевих чи
скелетних м'язів. Співвідношення АсАТ/АлАТ використовується для диференціальної діагностики
при захворюваннях печінки. Хоча співвідношення < 1 вказують на легке ураження печінки,
співвідношення > 1 пов'язане з важкими, часто хронічними захворюваннями печінки.
Клінічний діагноз повинен встановлюватися на основі інтеграції клінічних і лабораторних
даних.