Набір застосовується для визначення активності аспартатамінотрансферази у сироватці крові людини в клініко-діагностичних і біохімічних лабораторіях і науково-дослідницькій практиці.
- Лінійність калібрування повинна забезпечуватись в діапазоні від 0,1 мкмоль/(год×мл) до 2,5 мкмоль/(год×мл) (від 0,028 мккат/л до 0,7 мккат/л).
- Коефіцієнт варіації визначення - не більше 6 %.
- Чутливість 4 на 0,001 од. оптичної щільності – не більше 0,01 мкмоль/(год×мл) (510 нм).
- Зберігання набору - при температурі від плюс 2 °С до плюс 8 °С.
- Гарантійний термін придатності набору - 12 місяців від дня виготовлення.
- Набір призначений для застосування in vitro тільки кваліфікованим лабораторним персоналом.
ПРИНЦИП МЕТОДУ
Внаслідок амінування 2-оксоглутарової кислоти L-аспарагіновою кислотою, яке відбувається під дією аспартатамінотрансферази, утворюються L-глутамінова та щавелевооцтова кислоти, остання самовільно декарбоксилюється з утворенням піровиноградної кислоти. Визначення базується на вимірюванні оптичної щільності дінітрофенілгідразонів 2-оксоглутарової та піровиноградної кислот в лужному середовищі. Оскільки гідразон піровиноградної кислоти має більш високий коефіцієнт молярної екстинцiї, то спостерігається прямо пропорційна залежність оптичної щільності реакційного розчину від активності фермента.
СКЛАД НАБОРУ
-
Субстратно-буферний розчин АсАТ - фосфатний буфер (0,100 ± 0,005) моль/л, - L- аспарагінова кислота (0,100 ± 0,005) моль/л, - 2-оксоглутарова кислота (2,0 ± 0,1) ммоль/л.
-
Стоп-реагент - 2,4-дінітрофенілгідразин (1,00 ± 0,05) ммоль/л
-
Калібрувальний розчин - піровинограднокислого натрію (2,0 ± 0,1) ммоль/л, (220 ± 11) мкг/мл, (що відповідає 176 мкг/мл піровиноградної кислоти)
-
Гідроокис натрію (розчин (4,0 ± 0,2) моль/л (50 ± 2) мл чи сухий (8,00 ± 0,32) г) (ОБЕРЕЖНО, ЇДКА РЕЧОВИНА!)
ЗРАЗОК
Сироватка. Матеріал стабільний протягом 3 діб при температурі від плюс 2 °С до плюс 8 °С або протягом місяця при температурі мінус 20 °С. Якщо зберігати сироватку при кімнатній температурі, активність ферментів знижується. Активність ферменту в сироватці знижується після 3 діб зберігання при температурі від плюс 18 °С до плюс 25 °С - на 10 %. УНИКАТИ ГЕМОЛІЗУ!
ОБЛАДНАННЯ
-
Фотометричне обладнання, здатне вимірювати оптичну щільність розчинів при довжині хвилі 510 (500-550) нм в діапазоні (0-1,0) од. опт. щільності та довжині оптичного шляху 5 мм та 10 мм. Можливо використання аналізаторів типу ФП («Labsystems»).
-
Водяний термостат або автоматична водяна баня, які здатні підтримувати температуру (плюс 37 ± 1) °С (можливо використання сухоповітряного термостата з механічною циркуляцією повітря).
-
Колба мірна місткістю 500 мл, пробірки місткістю 10 мл (згідно з чинними нормативними документами).
-
Піпетки місткістю 1; 0.1 та 5 мл (ДСТУ EN ISO 835:2018).
ДІАГНОСТИЧНІ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Амінотрансферази каталізують утворення глутамінової кислоти з 2-оксоглутарата шляхом перенесення аміногруп. У нормі АсАТ присутня в багатьох тканинах, але найбільші концентрації визначаються в печінці, серцевих м'язах, а також в нирках і підшлунковій залозі. Рівень сироваткової АсАТ підвищується при гепатиті та інших захворюваннях печінки, що супроводжуються некрозом гепатоцитів: інфекційному мононуклеозі, холестазі, цирозі, метастатичній карциномі печінки, білій лихоманці і при призначенні різних лікарських засобів, таких як опіати, саліцилати або ампіцилін, після інфаркта міокарду, при важкій коронарній недостатності, після нападів параксизмальної тахікардії, при захворюваннях скелетних м'язів (наприклад, що прогресує мускульна дістрофія), при гострому панкриотиті та інших захворюваннях. Клінічний діагноз повинен встановлюватися на основі інтеграції клінічних і лабораторних даних.
ПРИГОТУВАННЯ РОБОЧИХ РОЗЧИНІВ
-
Розчин гідроокису натрію. Вміст флакону з гідроокисом натрію кількісно переносять до мірної колби на 500 мл, доводять розчин до мітки дистильованою водою. Потім переносять у поліетиленовий посуд, що герметично закривається. Розчин стабільний протягом 4-х тижнів при зберіганні при кімнатній температурі.
-
Калібрувальний розчин. Придатний до використання, після відкупорювання дозволяється його зберігання при кімнатній температурі протягом 12 годин.
-
Субстратно-буферний розчин. Придатний до використання, після відкупорювання флакону дозволяється його зберігання від плюс 2 °С до плюс 10 °С протягом 4-х тижнів.
-
Стоп - реагент. Придатний до використання. Розчин стабільний до закінчення гарантійного терміну придатності (при дотриманні умов зберігання, зазначених на упаковці).
КОНТРОЛЬ ЯКОСТІ
Для контролю ходу реакції і процедури вимірювання рекомендується використовувати контрольні сироватки зі значеннями, визначеними даним методом. Наприклад: ”ФілоНорм” або „ФілоПат” (Україна). Якщо значення контролю виходять за межі встановленого діапазону, перевірте обладнання, реактиви та можливі технічні проблеми. Кожна лабораторія повинна встановити власну внутрішню систему контролю якості та коригуючі дії, якщо контроль не відповідає допустимим нормам.
НОРМАЛЬНІ ВЕЛИЧИНИ
Активність аспартатамінотрансферази (0,1-0,45) мкмоль/(год×мл) при плюс 37 °С. Дані величини орієнтовні, відповідно до правил GLP (Належної Лабораторної Практики) рекомендується визначення власних нормальних величин в кожній лабораторії, характерних для обстежуваного контингенту.
ІНТЕРФЕРЕНЦІЯ
Гемоліз, кетосполуки, аспірин, барбітурати, опіати, пеніцилін завищують результат при визначенні АсАТ. На хід визначення можуть впливати деякі ліки і речовини.