Набор применяется для определения активности аспартатаминотрансферазы в сыворотке крови человека в клинико-диагностических и биохимических лабораториях и научно-исследовательской практике.
- Линейность калибровки должна обеспечиваться в диапазоне от 0,1 мкмоль/(ч×мл) до 2,5 мкмоль/(ч×мл) (от 0,028 мккат/л до 0,7 мккат/л).
- Коэффициент вариации определения - не более 6 %.
- Чувствительность 4 на 0,001 ед. оптической плотности - не более 0,01 мкмоль/(ч×мл) (510 нм).
- Хранение набора - при температуре от плюс 2 °С до плюс 8 °С.
- Гарантийный срок годности набора - 12 месяцев со дня изготовления.
- Набор предназначен для применения in vitro только квалифицированным лабораторным персоналом.
ПРИНЦИП МЕТОДА
В результате аминирования 2-оксоглутаровой кислоты L-аспарагиновой кислотой, которое происходит под действием аспартатаминотрансферазы, образуются L-глутаминовая и щавелевоуксусная кислоты, последняя самопроизвольно декарбоксилируется с образованием пировиноградной кислоты. Определение основано на измерении оптической плотности динитрофенилгидразонов 2-оксоглутаровой и пировиноградной кислот в щелочной среде. Поскольку гидразон пировиноградной кислоты имеет более высокий коэффициент молярной экстинкции, то наблюдается прямо пропорциональная зависимость оптической плотности реакционного раствора от активности фермента.
СОСТАВ НАБОРА
-
Субстратно-буферный раствор АсАТ - фосфатный буфер (0,100 ± 0,005) моль/л, - L-аспарагиновая кислота (0,100 ± 0,005) моль/л, - 2-оксоглутаровая кислота (2,0 ± 0,1) ммоль/л.
-
Стоп-реагент - 2,4-динитрофенилгидразин (1,00 ± 0,05) ммоль/л
-
Калибровочный раствор - пировиноградной кислоты натрия (2,0 ± 0,1) ммоль/л, (220 ± 11) мкг/мл, (что соответствует 176 мкг/мл пировиноградной кислоты)
-
Гидроокись натрия (раствор (4,0 ± 0,2) моль/л (50 ± 2) мл или сухой (8,00 ± 0,32) г) (ОСТОРОЖНО, ЕДКОЕ ВЕЩЕСТВО!)
ОБРАЗЕЦ
Сыворотка. Материал стабилен в течение 3 суток при температуре от плюс 2 °С до плюс 8 °С или в течение месяца при температуре минус 20 °С. При хранении сыворотки при комнатной температуре активность ферментов снижается. Активность фермента в сыворотке снижается после 3 суток хранения при температуре от плюс 18 °С до плюс 25 °С - на 10 %. ИЗБЕГАТЬ ГЕМОЛИЗА!
ОБОРУДОВАНИЕ
-
Фотометрическое оборудование, способное измерять оптическую плотность растворов при длине волны 510 (500-550) нм в диапазоне (0-1,0) ед. опт. плотности и длине оптического пути 5 мм и 10 мм. Возможно использование анализаторов типа ФП («Labsystems»).
-
Водяной термостат или автоматическая водяная баня, способные поддерживать температуру (плюс 37 ± 1) °С (возможно использование суховоздушного термостата с механической циркуляцией воздуха).
-
Колба мерная емкостью 500 мл, пробирки емкостью 10 мл (согласно действующим нормативным документам).
-
Пипетки емкостью 1; 0,1 и 5 мл (ДСТУ EN ISO 835:2018).
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Аминотрансферазы катализируют образование глутаминовой кислоты из 2-оксоглутарата путем переноса аминогрупп. В норме АсАТ присутствует во многих тканях, но наибольшие концентрации определяются в печени, сердечной мышце, а также в почках и поджелудочной железе. Уровень сывороточной АсАТ повышается при гепатите и других заболеваниях печени, сопровождающихся некрозом гепатоцитов: инфекционном мононуклеозе, холестазе, циррозе, метастатической карциноме печени, белой лихорадке и при назначении различных лекарственных средств, таких как опиаты, салицилаты или ампициллин, после инфаркта миокарда, при тяжелой коронарной недостаточности, после приступов параксизмальной тахикардии, при заболеваниях скелетных мышц (например, прогрессирующей мышечной дистрофии), при остром панкреатите и других заболеваниях. Клинический диагноз должен устанавливаться на основе интеграции клинических и лабораторных данных.
ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАБОЧИХ РАСТВОРОВ
-
Раствор гидроокиси натрия. Содержимое флакона с гидроокисью натрия количественно переносят в мерную колбу на 500 мл, доводят раствор до отметки дистиллированной водой. Затем переносят в полиэтиленовый герметично закрывающийся сосуд. Раствор стабилен в течение 4-х недель при хранении при комнатной температуре.
-
Калибровочный раствор. Пригоден к использованию, после вскрытия разрешается его хранение при комнатной температуре в течение 12 часов.
-
Субстратно-буферный раствор. Пригоден к использованию, после вскрытия флакона разрешается его хранение от плюс 2 °С до плюс 10 °С в течение 4-х недель.
-
Стоп-реагент. Пригоден к использованию. Раствор стабилен до окончания гарантийного срока годности (при соблюдении условий хранения, указанных на упаковке).
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Для контроля хода реакции и процедуры измерения рекомендуется использовать контрольные сыворотки со значениями, определенными данным методом. Например: «ФилоНорм» или «ФилоПат» (Украина). Если значения контроля выходят за пределы установленного диапазона, проверьте оборудование, реактивы и возможные технические проблемы. Каждая лаборатория должна установить собственную внутреннюю систему контроля качества и корректирующие действия, если контроль не соответствует допустимым нормам.
НОРМАЛЬНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ
Активность аспартатаминотрансферазы (0,1-0,45) мкмоль/(час×мл) при плюс 37 °С. Данные величины ориентировочные, в соответствии с правилами GLP (Надлежащей Лабораторной Практики) рекомендуется определение собственных нормальных величин в каждой лаборатории, характерных для обследуемого контингента.
ИНТЕРФЕРЕНЦИЯ
Гемолиз, кетосоединения, аспирин, барбитураты, опиаты, пенициллин завышают результат при определении АсАТ. На ход определения могут влиять некоторые лекарства и вещества.