Принцип методу
Креатинкіназа (КK) каталізує реверсне перенесення фосфатної групи від креатинфосфата до АДФ. Ця реакція пов'язана з такими каталізаторами як гексокіназа (ГК) і глюкозо-6-фосфат дегідрогеназа (Г6ФДГ):
Креатинфосфат + АДФ → Креатин + АТФ
АТФ + D-Глюкоза → АДФ + Г6Ф
Г6Ф + НАДФ+ → 6-Фосфоглюконат + НАДФ + H+
Швидкість утворення НАДФ пропорційна каталітичний активності КK, що міститься у зразку і вимірюється на фотометрі.
Клінічне значення
Креатинкіназа - фермент, який широко поширений в тканинах організму. Її фізіологічна роль пов'язана з аденозинтрифосфатом (АТФ), що постачає енергетичний субстрат для м'язового скорочення.
Підвищені значення КK спостерігаються при захворюваннях м'язового скелету і після інфаркту міокарда.
Клінічний діагноз не повинен базуватися тільки на одному показникові, необхідно враховувати клінічні та інші лабораторні дані.
Склад набору
- Реагент 1. Буфер: Імідазол рН 6.7 - 125 mmol/l (ммоль/л); D-глюкоза - 25 mmol/l (ммоль/л); N-ацетилL-цистеин (NАС) - 25 mmol/l (ммоль/л); ацетат магнезіі – 1.25 mmol/l (ммоль/л); НАДФ – 2.52 mmol/l (ммоль/л); ЕДТА – 2.02 mmol/l (ммоль/л); гексокіназа ≥ 6 800 U/l (Од/л).
- Реагент 2. Ензими: АДФ – 15.2 mmol/l (ммоль/л); АМФ - 25 mmol/l (ммоль/л); діаденозин-5-пентафосфат - 103 mmol/l (ммоль/л), Г6Ф-ДГ ≥8 800 U/l (Од/л); креатинфосфат - 250 mmol/l (ммоль/л).
- Інструкція з використання.
- Сертифікат якості.
Аналітичні характеристики
- Лінійність вимірювального діапазону: 20 - 1000 U/l (Од/л). Відхилення від лінійності не перевищує 7 %. Якщо отримані результати були більше, ніж межі лінійності, розведіть зразки 1:9 (в десять разів) NaCl 9 g/l (г/л) та помножте результат на 10.
- Чутливість не менш 20 U/l (Од/л).
- Коефіцієнт варіації результатів визначень – не більш 7%.
Матеріал для дослідження
1.Сироватка або плазма крові (рекомендується використовувати гепарин, в якості антикоагулянта). Досліджувані сироватки або плазми повинні бути ретельно відокремлені від формених елементів крові не пізніше, ніж через 1 h (год) після взяття крові. Уникайте використання мутних, ліпідних та гемолітичних зразків.
Стабільність зразків 7 d (доб) при 2-8 ºC, в захищеному від світла місці.
Активність креатинкінази знижується на 10% після 1 d (доб) зберігання при 2-8 ºC або після 1 h (год) при 15-25 ºC.
| 1 | 2 | 3 | 4 |
|---|---|---|---|
| 25 ºC | 30 ºC | 37 ºC | |
| Жінки до | 70 U/l (Од/л) | 110 U/l (Од/л) | 170 U/l (Од/л) |
| Чоловіки до | 80 U/l (Од/л) | 130 U/l (Од/л) | 195 U/l (Од/л) |
Перелік необхідного устаткування
- Спектрофотометричне або колориметричне обладнання з довжиною хвилі 340 nm (нм).
- Відповідні кювети з товщиною оптичного шару 1 cm (см).
- Загальне лабораторне обладнання.
Прим: Адаптації до напівавтоматичних і автоматичних приладів надаються за запитом
Підготовка реагентів
Перед використанням набір витримати при кімнатній температурі протягом 30 min (хв).
Приготування робочого реагенту РР: змішати 4 об’єми Р1 та 1 об'єм Р2.
РР стабільний 2 wk (тижд) при 2-8 ºC або 48 h (год) при 15-25 ºC.
Умови вимірювання:
- довжина хвилі 340 nm (нм)
- кювета з товщиною оптичного шару 1 cm (см)
- температура 25 ºС / 30 ºС / 37 ºС
Референтні величини
Ґрунтуючись на результатах досліджень, проведених лабораторіями, рекомендуємо користуватися нормами, приведеними нижче. Разом з тим, відповідно до правил GLP (Гарної лабораторної практики), кожна лабораторія повинна сама визначити для себе параметри норми, характерні для обстежуваної популяції.
Комплектація
| 1 | 2 |
|---|---|
| 1.022 | |
| Вміст | 100 визн. |
| Р1 | 2 х 40 ml (мл) |
| Р2 | 2 х 10 ml (мл) |