Лужна фосфатаза розщеплює фенілфосфат з утворенням фенолу. Окислювальне сполучення фенолу з 4амінофеназоном утворює червоний барвник, інтенсивність забарвлення котрого визначається фотометрично. Активність ферменту є пропорційною прирощенню оптичної щільності розчину.

Клінічне значення

Лужна фосфатаза - фермент, який присутній майже у всіх тканинах організму, особливо високий вміст в кістках, печінці, плаценті, кишечнику та нирках. Як збільшення, так і зменшення ЛФ має велике клінічне значення.

Збільшення активністі ЛФ головним чином зустрічається при захворюваннях кісток (хворобі Педжета, остеомаляціі, рахіті) або захворюваннях печінки (холестаз, обструктивне захворювання печінки, гепатит, саркоїдоз, гепатотоксичні випадки,механічній жовтільниці), метастазування в кістки та печінку.

Причини зниження ЛФ плазми: кретинізм та дефіцит вітаміну C, гіпотиріоз, остеопороз.

Клінічний діагноз не повинен базуватися тільки на одному показникові, необхідно враховувати клінічні та інші лабораторні дані.

Склад набору

Реагент 1. Буфер, концентрат: карбонат натрію, бікарбонат натрію, 4-амінофеназон.
Реагент 2. Субстрат: динатрійфенілфосфат.
Реагент 3. Окислювач: перйодат натрію.
Стандарт. Водний розчин фенолу.
Інструкція з використання
Сертифікат якості.

Аналітичні характеристики

Лінійність вимірювального діапазону: 100-10000 nmol/(sl) (нмоль /(секл)). Відхилення від лінійності не перевищує 7%. Якщо отримані результати були більше, ніж межі лінійності, розведіть зразки NaCl 9 g/l (г/л) та помножте результат на коефіцієнт розведення.
Чутливість не менш 100 nmol/(sl) (нмоль /(секл)).
Коефіцієнт варіації результатів визначень – не більш 7%.

Матеріал для дослідження

Сироватка крові. Досліджувані сироватки повинні бути ретельно відокремлені від формених елементів крові не пізніше, ніж через 1 h (год) після взяття крові. Уникайте використання мутних, ліпідних та гемолітичних зразків.

Перелік необхідного устаткування

Спектрофотометричне або колориметричне обладнання з довжиною хвилі 540 (490-550) nm (нм).
Відповідні кювети з товщиною оптичного шару 1 cm (см).
Водяна баня.
Загальне лабораторне обладнання.

Прим: Адаптації до напівавтоматичних і автоматичних приладів надаються за запитом.

Підготовка реагентів

Перед використанням набір витримати при кімнатній температурі протягом 30 min (хв).

Буферний розчин. Вміст флакону з Р1 розвести в мірній колбі вмістом 500 ml (мл), довести до мітки дистильованою водою. Розчин стійкий при зберіганні 2-8 °С протягом 1 mth (міс).
Субстратно-буферний розчин. Готують змішуванням Буферного розчину та Р2 Для рідкого субстрату: змішати у співвідношенні 49:1 Для сухого субстрату: на аналітичних вагах зважити навіску 64 мг (mg) субстрату з флакону і розчинити в 50 ml (мл) Буферного розчину. Субстратно-буферний розчин готують перед застосуванням.
Окислювач. Вміст флакону з Р3 розчинити в мірній колбі вмістом 500 ml (мл), довести дистильованою водою до мітки. Розчин стійкий при зберіганні 2-8 °С.
Стандарт. Із флакону відібрати 2,5 ml (мл) розчину фенолу, перенести в мірную колбу вмістом 50 ml (мл), довести дистильованою водою до мітки. Розчин стійкий при зберіганні 2-8°С протягом 1 wk (тижд).

Можна змішувати кратні обсяги реагентів, не змінюючи їх співвідношення.

Умови вимірювання:

довжина хвилі 540 (490-550) nm (нм)
кювета з товщиною оптичного шару 1 cm (см)
температура 37 ºC

Референтні величини

Ґрунтуючись на результатах досліджень, проведених лабораторіями, рекомендуємо користуватися нормами, приведеними нижче. Разом з тим, відповідно до правил GLP (Гарної лабораторної практики), кожна лабораторія повинна сама визначити для себе параметри норми, характерні для обстежуваної популяції.

Чоловіки: 900-2290 nmol/(sl) (нмоль /(секл))
Жінки: 740-2100 nmol/(sl) (нмоль /(секл))

Комплектація