В основі визначення активності АCТ з динітрофенілгідрозином лежить метод Райтмана-Френкеля. Аспартатамінотрансфераза у присутності а-кетоглютарата каталізує реакцію переамінування L -аспартата з утворенням пірувату. АCТ a-кетоглутарат + L- аспартат → L -глутамат+ оксалацетат → піруват

Піруват з 2,4-динітрофенілгідрозином в лужному середовищі утворює динітрофенілгідразон, інтенсивність забарвлення якого пропорційна активності АСТ і вимірюється на фотометрі.

Клінічне значення

АСТ - фермент, що бере участь у метаболізмі амінокислот в клітині. Фермент міститься в тканинах серця, печінки, скелетної мускулатури, нервовій тканині та нирках, у меншій мірі - в підшлунковій залозі, селезінці і легенях. Фермент локалізується як в цитоплазмі, так і в мітохондріях клітин, тому будь-яке пошкодження клітин призводить до збільшення його вмісту (активності) в крові.

У міокарді активність АСТ у 10 000 разів вище, ніж у сироватці крові. В еритроцитах АСТ міститься в кількості в 10 разів більше, ніж у сироватці.

Активність ферменту у жінок трохи нижче, ніж у чоловіків. При інфаркті міокарда активність АСТ у сироватці може підвищуватися в 2 - 20 разів, підвищену активність можна виявити ще до появи типових ознак інфаркту на ЕКГ. Існує залежність між розмірами некрозу в серцевому м'язі і рівнем АСТ у сироватці крові.

Наростання активності може свідчити як про розширення вогнища інфаркту, так і про залучення в процес інших органів і тканин, наприклад, печінки. Одночасне визначення активності двох амінотрансфераз (АЛТ і АСТ) є цінним діагностичним тестом. Активність АЛТ зростає при інфаркті міокарда, але в меншій мірі, ніж активність АСТ. Для уточнення діагнозу проводять розрахунок коефіцієнта де Рітіса: співвідношення активностей АСТ/АЛТ. У нормі це становить 1.33 ± 0.42. При інфаркті міокарда активність АЛТ збільшується незначно, тому коефіцієнт де Рітіса різко зростає.

Клінічний діагноз не повинен базуватися на одному показникові, необхідно враховувати клінічні та інші лабораторні дані.

Склад набору

Реагент 1. Субстрат: DL-Аспартат - 100 mmol/l (ммоль/л); α- кетоглютарат - 2 mmol/l (ммоль/л).
Реагент 2. Проявник: 2,4-динітрофенілгідразин - 1 mmol/l (ммоль/л).
Реагент 3. Натрію гідроксид 0.4 N концентрат 20х.
Калібратор. Розчин пірувату - 2.0 mmol/l (ммоль/л).
Інструкція з використання.
Сертифікат якості.

Аналітичні характеристики

Лінійність вимірювального діапазону: 0.028 - 1.01 µkat/l (мккат/л). Відхилення від лінійності не перевищує 6%. Якщо отримані результати були більше, ніж межі лінійності розведіть зразки NaCl 9 g/l (г/л)та помножте результат на фактор розведення.
Чутливість не менш 0.028 µkat/l (мккат/л).
Коефіцієнт варіації результатів визначень - не більш 6%.

Матеріал для дослідження

Сироватка або плазма крові. Досліджувані сироватки або плазми повинні бути ретельно відокремлені від формених елементів крові не пізніше, чим через 1 h (год) після взяття крові. Уникайте використання мутних, ліпідних та гемолітичних зразків.

Перелік необхідного устаткування

Спектрофотометричне або колориметричне обладнання з довжиною хвилі 505 nm (нм).
Відповідні кювети з товщиною оптичного шару 1 cm (см).
Термостатична водяна баня з 37 ºC.
Загальне лабораторне обладнання. Прим: Адаптації до напівавтоматичних і автоматичних приладів надаються за запитом

Підготовка реагентів

Перед використанням набір витримати при кімнатній температурі протягом 30 min (хв).

Р1, Р2 готові до використання.

Р3 розвести дистильованою водою 1:19 (в 20 разів).

Умови вимірювання:

довжина хвилі 505 (500-600) nm (нм)
кювета з товщиною оптичного шару 1 cm (см)
температура 15-25-37 ºC

Референтні величини

Ґрунтуючись на результатах досліджень, проведених лабораторіями, рекомендуємо користуватися нормами, приведеними нижче. Разом з тим, відповідно до правил GLP (Гарної лабораторної практики), кожна лабораторія повинна сама визначити для себе параметри норми, характерні для обстежуваної популяції.

Нормальні рівні АСТ в сироватці крові становить: 0.028-0.125 µkat/l (мккат/л) або 0.1-0.45 µmol/h*ml (мкмоль/год *мл) при температурі 37 ºC.

Перехід в додаткові одиниці: U/l (Од/л) х 0.01667 = µkat/l (мккат/л). µkat/l (мккат/л) х 3.6 = µmol/h*ml (мкмоль/год *мл)

Комплектація

1	2	3	4
	1.017	1.018	1.019
Вміст	250 визн.	500 визн.	1000 визн.
Р1	1 х 50 ml (мл)	1 х 100 ml (мл)	1 х 200 ml (мл)
Р2	1 х 50 ml (мл)	1 х 100 ml (мл)	1 х 200 ml (мл)
Р3	1 х 25 ml (мл)	1 х 50 ml (мл)	1 х 100 ml (мл)
Калібратор	1 х 4 ml (мл)	1 х 6 ml (мл)	1 х 8 ml (мл)