В основі визначення активності АЛТ з динітрофенілгідрозином лежить метод Райтмана-Френкеля. Аланінамінотрансфераза у присутності а-кетоглютарата каталізує реакцію переамінування L –аланіну з утворенням пірувату.

L-aланін + α-кетоглутарат АЛТ --> глутамат + піруват

Піруват з 2,4-динітрофенілгідрозином в лужному середовищі утворює динітрофенілгідразон, Інтенсивність кольору пропорційна концентрації АЛТ в зразку.

Клінічне значення

АЛТ - фермент, що бере участь у метаболізмі амінокислот в клітині.

Найбільший вміст у печінки, нирках, підшлунковій залозі, серцевому м'язі, скелетних м'язах. У клітині фермент локалізується в цитоплазмі, тому будь-яке пошкодження клітин призводить до збільшення його вмісту (активності) в крові. Органічні ураження при гострих або хронічних захворюваннях, що супроводжуються некрозом клітин будь-якої етіології, призводять до виходу АЛТ з області ураження в кров’яне русло, що призводить до підвищення їх активності в крові. Збільшення активності АЛТ у сироватці крові найбільш характерно при різних захворюваннях печінки, що супроводжуються некрозами (гепатити, токсичний вплив). АЛТ є показником оцінки тяжкості перебігу вірусних гепатитів В і С. Одночасне визначення активність двох амінотрансфераз (АЛТ і АСТ) є цінним діагностичним тестом. Активність АЛТ зростає при інфаркті міокарда, але в меншій мірі, ніж активність АСТ (аспартатамінотрансфераза). Для уточнення діагнозу проводять розрахунок коефіцієнта де Рітіса: співвідношення активностей АСТ/АЛТ. У нормі це становить 1.33 ± 0.42. Різке перевищення цього показника свідчить про враження серцевого м'яза. Також у якості біомаркеру в діагностиці інфаркту міокарда рекомендується використовувати визначення активності креатинфосфокінази МВ-типу (КФКМВ).

Зниження коефіцієнта до 0.6 - 0.8 характерно при некрозі печінкових клітин при вірусних гепатитах. Клінічний діагноз не повинен базуватися на одному показникові, необхідно враховувати клінічні та інші лабораторні дані.

Склад набору

Реагент 1. Субстрат: DL-Аланін - 200 mmol/l (ммоль/л); α- кетоглютарат - 2 mmol/l (ммоль/л).
Реагент 2. Проявник: 2,4-динітрофенілгідразин - 1 mmol/l (ммоль/л).
Реагент 3. Натрію гідроксид 0.4 N концентрат 20х.
Калібратор. Розчин пірувату - 2.0 mmol/l (ммоль/л).
Інструкція з використання.
Сертифікат якості.

Аналітичні характеристики

Лінійність вимірювального діапазону: 0.028 - 1.01 µkat/l (мккат/л). Відхилення від лінійності не перевищує 6%. Якщо отримані результати були більше, ніж межі лінійності розведіть зразки NaCl 9 g/l (г/л) та помножте результат на фактор розведення.
Чутливість не менш 0.028 µkat/l (мккат/л).
Коефіцієнт варіації результатів визначень - не більш 6%.

Матеріал для дослідження

Сироватка або плазма крові. Досліджувані сироватки або плазми повинні бути ретельно відокремлені від формених елементів крові не пізніше, ніж через 1 h (год) після взяття крові. Уникайте використання мутних, ліпідних та гемолітичних зразків.

Перелік необхідного устаткування

Спектрофотометричне або колориметричне обладнання з довжиною хвилі 505 nm (нм).
Відповідні кювети з товщиною оптичного шару 1 cm (см).
Термостатична водяна баня 37 ºC.
Загальне лабораторне обладнання. Прим: Адаптації до напівавтоматичних і автоматичних приладів надаються за запитом

Підготовка реагентів

Перед використанням набір витримати при кімнатній температурі протягом 30 min (хв). Р1, Р2 готові до використання. Р3 розвести дистильованою водою 1:19 (у 20 разів).

Умови вимірювання:

довжина хвилі 505 (500-600) nm (нм)
кювета з товщиною оптичною шару 1 cm (см)
температура 15-25-37 ºC

Референтні величини

Ґрунтуючись на результатах досліджень, проведених лабораторіями, рекомендуємо користуватися нормами, приведеними нижче. Разом з тим, відповідно до правил GLP (Гарної лабораторної практики), кожна лабораторія повинна сама визначити для себе параметри норми, характерні для обстежуваної популяції.

Нормальні рівні АЛТ в сироватці крові становить: 0.028-0.19 µkat/l (мккат/л), або 0.1-0.68 µmol/hml (мкмоль/годмл) при температурі 37 ºC.

Перехід в додаткові одиниці: U/l (Од/л) х 0.01667 = µkat/l (мккат/л). µkat/l (мккат/л) х 3.6 = µmol/h*ml (мкмоль/год *мл)

1	2	3
	Внутрисерійна (n=20)	Міжсерійна (n=20)
Значення, U/l (Од/л)	39 / 121	36,7 / 123
SD	0,45 / 0,39	0,74 / 1,52
CV, %	1,15 / 0,32	2,02 / 1,24

Комплектація

1	2	3	4
	1.010	1.011	1.012
Вміст	250 визн.	500 визн.	1000 визн.
Р1	1 х 50 ml (мл)	1 х 100 ml (мл)	1 х 200 ml (мл)
Р2	1 х 50 ml (мл)	1 х 100 ml (мл)	1 х 200 ml (мл)
Р3	1 х 25 ml (мл)	1 х 50 ml (мл)	1 х 100 ml (мл)
Калібратор	1 х 4 ml (мл)	1 х 6 ml (мл)	1 х 8 ml (мл)