Опис
Початком діагностикумів, що діє, є специфічні антигени шигел, фіксовані на поверхні еритроцитів. При взаємодії із сироватками, що містять антитіла до шигелів, спостерігається феномен аглютинації еритроцитів.
Склад
Діагностикум еритроцитарний шигельозний Флекснера 1-5 отриманий шляхом сенсибілізації еритроцитів сумішшю антигенів шигел Флекснера - відтипів 1а, 1в, 2а, 3а, 4в і 5 або Діагностикум еритроцитарний шигелозний Зонне.
Є 1% завись формалінізованих еритроцитів барана сенсибілізованих ліпополісахаридними антигенами з шигел у фосфатному буферному розчині (рН-7,2±0,2; концентрація – 0,06 моль/л).
Консервант – формалін.
Гомогенна суспензія коричневого кольору без пластівців; при відстоюванні утворюється 2 шари: щільний коричневий осад еритроцитів і прозора жовта надосадова рідина. 1 флакон - 3 мл.
Сироватки діагностичні шигельозні (Флекснер 1-5 або Зонне) неадсорбовані сухі - гомогенна маса від білого з коричневим відтінком до бежевого кольору. 1 флакон - з 0,1 мл.
1% завись формалінізованих, несенсибілізованих еритроцитів барана - гомогенна суспензія коричневого кольору без пластівців; при відстоюванні утворюється 2 шари: щільний коричневий осад еритроцитів і прозора жовта надосадова рідина. 1 флакон – 1 мл.
Підтримуючий розчин – 0,9 % розчин натрію хлориду – прозора безбарвна рідина, рН від 6,5 до 7,5. 2 флакони – по 8 мл.
Планшет круглодонний для імунологічних реакцій одноразового застосування - складається з 8 рядів, кожен з яких включає 12 лунок з прозорим, безбарвним, круглим дном. 1 шт.
Показання для застосування
Призначений для виявлення специфічних антитіл до різних видів шигел у сироватці крові людини у реакції пасивної гемаглютинації (РПГА).
Режим дозування та спосіб застосування
Як аналізовані зразки використовують зразки сироватки крові людини.
Аналізований зразок зберігають в умовах, що запобігають бактеріальному проросту при температурі від 2 до 8 0С не більше 72 годин. Допускається заморожування, аналізовані заморожені зразки перед дослідженням розморозити при кімнатній температурі.
Аналіз зразків з вираженим гемолізом, бактеріальним проростом, а також довго зберігалися без заморожування або повторно заморожуються не допускається.
Приготування розчинів для РПГА.
Флакон з сироваткою діагностичної шигельозної (Флекснера 1-5 або Зонне) неадсорбованої сухої розкрити і додати 1 мл 0,9% розчину натрію хлориду, що додається, отримавши, таким чином, розведення 1:10. Розведення 1:100 готувати в першій лунці планшета, що додається: до 0,09 мл 0,9 % розчину натрію хлориду додати 0,01 мл сироватки діагностичної шигельозної, розведеної 1:10. Розкритий флакон із сироваткою діагностичної шигельозної (Флекснера 1-5 або Зонне) неадсорбованої сухої при розведенні 1:10 у закритому вигляді можна зберігати при температурі від 2 до 8 ºС протягом одного місяця.
Діагностикум готовий до застосування. Перед розкриттям флакон з діагностикумом необхідно обережно потрусити до одержання гомогенної суспензії. Під час роботи струшування рекомендується повторювати. Розкритий флакон із діагностикумом у закритому вигляді можна зберігати при температурі від 2 до 8 ºС протягом одного місяця. 0,9% розчин хлориду натрію. Готовий до застосування.
Проведення РПГА.
При контролі будь-якої кількості сироваток, що аналізуються, обов'язкова постановка 1 ряду аглютинації з сироваткою діагностичної шигельозної (Флекснера 1-5 або Зонне) неадсорбованої сухої.
Для постановки РПГА використовують планшет для імунологічних реакцій одноразового застосування. Готують дворазові серійні розведення аналізованих сироваток в 0,05 мл додається 0,9% розчину натрію хлориду починаючи з 1:10 до 1:2560 і 1 ряд дворазового серійного розведення сироватки діагностичної шигельозної (Флекснера 1-5 або Зонне) розведення 1:100 до подвоєного титру, зазначеного на етикетці флакона.
У кожну з лунок із розведеннями сироваток додають по 0,025 мл діагностикуму.
Обов'язковими контролюми є:
Планшет струшують і поміщають на 2-2,5 год термостат при температурі (37 + 1) оС, після чого проводять облік результатів.
ОБЛІК РЕЗУЛЬТАТІВ
Облік реакції здійснюється за чотирихресною системою:
++++ всі еритроцити аглютиновані і рівномірно покривають дно лунки;
+++ аглютиновані майже всі еритроцити. На їх тлі є малопомітне кільце з неаглютинованих еритроцитів, що осіли;
++ поряд з рівномірним аглютинатом на дні лунки є осад з неаглютинованих еритроцитів у вигляді маленького «кільця» або «гудзика»;
+ більшість еритроцитів неаглютиновані і осіли у вигляді маленького «кілечка» з рівними краями або «гудзики» у центрі дна лунки.
Позитивною вважається реакція не менш як на 3+.
Результати, отримані в РПГА можна вважати достовірними в тому випадку, якщо з сироваткою діагностичної шигельозної (Флекснера 1-5 або Зонне) неадсорбованої сухої 1:100 отримано позитивний результат у розведенні не нижче ніж її титру ½, а в 2 лунках з аналізованої сироваткою в розведенні 1:10, а з сироваткою діагностичної шигельозної (Флекснера 1-5 або Зонне) неадсорбованої сухої у розведенні 1:100 не повинно бути пластівців та осаду; у лунках з 0,9% розчином натрію хлориду та діагностикумом, а також з несенсибілізованими формалінізованими еритроцитами барана та аналізованою сироваткою – реакція негативна. Титром антитіл досліджуваної сироватки вважається останнє розведення сироватки, яка ще дає позитивну аглютинацію еритроцитів.
Інтерпретація результатів.
Діагностично достовірним є збільшення (або падіння) титрів специфічних антитіл на три розведення для дослідження парних сироваток у динаміці захворювання. Запобіжні заходи при застосуванні
Сироватка, що входить до складу набору, діагностична шигельозна (Флекснера 1-5 або Зонне) неадсорбована суха інактивована. Аналізовані сироватки повинні бути інактивовані за температури 56 0С протягом 30 хвилин.
Аналізовані сироватки, а також реагенти, обладнання та інструменти, що знаходяться з ними в контакті, можуть являти собою потенційно інфекційний матеріал, і поводитися з ним слід обережно:
Об'єктивні результати аналізу гарантуються під час таких умов:
