Опис
Початком діагностикуму, що діє, є Ві-антиген, фіксований на поверхні еритроцитів. При взаємодії із сироватками, що містять антитіла до Ві-антигену, спостерігається феномен аглютинації еритроцитів.
Форма випуску
Випускається у наборі 1 флакон з діагностикумом - 3 мл, діагностична сироватка сальмонельозна адсорбована рецептор Ві Суха у вигляді ліофілізату з 0,1 мл 1 флакон; 0,9% розчин натрію хлориду - 2 флакони по 8 мл; планшет для імунологічних реакцій одноразового застосування – 1 шт.
Склад
Діагностикум еритроцитарний сальмонельозний Ві-антигенний, який являє собою 0,75% завись формалінізованих та сенсибілізованих Ві-антигеном еритроцитів людини Про (I) групи крові у фос-фатному буферному розчині (рН-7,2±0,2; концентрація - 0,06 моль/л). Консервант – формалін.
гомогенна суспензія коричневого кольору без пластівців; при відстоюванні утворюється 2 шари: щільний коричневий осад еритроцитів і прозора жовтувата надосадова рідина 1 флакон-3 мл.
Сироватка діагностична сальмонельозна адсорбована рецептор Ви суха - гомогенна маса від білого з коричневим відтінком до бежевого кольору. 1 флакон – з 0,1 мл.
Підтримуючий розчин – 0,9 % розчин натрію хлориду – прозора безбарвна рідина, рН від 6,5 до 7,5. 2 флакони – по 8 мл.
Планшет круглодонний для імунологічних реакцій одноразового застосування - складається з 8 рядів, кожен з яких включає 12 лунок з прозорим, безбарвним, круглим дном. 1 шт.
Діагностикум повинен аглютинуватися в РПГА сироваткою діагностичної сальмонельозної адсорбованої рецептор Ві сухий у розведенні не нижче 1/2 їх титру, але не менше ніж 1/160. Діагностикум не повинен аглютинуватися сироватками діагностичними сальмонельозними адсорбованими сухими для РА: Про рецептор 9 - у розведенні 1:40 і вище, Н рецептор d - у розведенні 1:10 і вище.
Показання для застосування
Призначений для виявлення в сироватці крові людини специфічних антитіл до Ві-антигена сальмонел тифу реакції пасивної гемаглютинації (РПГА).
Режим дозування та спосіб застосування
Як аналізовані зразки використовують зразки сироватки крові людини.
Аналізований зразок зберігають в умовах, що запобігають бактеріальному проросту при температурі від 2 до 8 °С не більше 72 годин. Допускається заморожування, аналізовані заморожені зразки перед дослідженням розморозити при кімнатній температурі.
Аналіз зразків з вираженим гемолізом, бактеріальним проростом, а також довго зберігалися без заморожування або повторно заморожуються не допускається.
ПРОВЕДЕННЯ АНАЛІЗУ
Приготування розчинів для РПГА
Флакони з сироваткою діагностичної сальмонельозної адсорбованої рецептор Ві сухий розкрити і додати 1 мл 0,9% розчину натрію хлориду, що додається, отримавши, таким чином, розведення 1:10, що є робочим розведенням.
Розкритий флакон із сироваткою діагностичної сальмонельозної адсорбованої рецептор Ві сухий при розведенні 1:10 у закритому вигляді можна зберігати при температурі від 2 до 8 °С протягом одного місяця.
Діагностикум готовий до застосування. Перед розкриттям флакон з діагностикумом необхідно обережно потрусити до одержання гомогенної суспензії. Під час роботи струшування рекомендується повторювати.
Розкритий флакон із діагностикумом у закритому вигляді можна зберігати при температурі від 2 до 8 °С протягом одного місяця. 0,9% розчин хлориду натрію. Готовий до застосування.
Проведення РПДА
При контролі будь-якої кількості аналізованих сироваток обов'язковою є постановка 1 ряду аглютинації з сироваткою діагностичної сальмонельозної адсорбованої рецептор Ві сухий.
Для постановки РПГА використовують планшет для імунологічних реакцій одноразового застосування. Готують дворазові серійні розведення аналізованих сироваток в 0,05 мл додається 0,9% розчину натрію хлориду починаючи з 1:10 до 1:2560 і 1 ряд дворазового серійного розведення сироватки діагностичної сальмонельозної адсорбованої рецептор Ві сухий, починаючи до подвоєного титру, зазначеного на етикетці флаконів даної сироватки.
У кожну з лунок із розведеннями сироватки додають по 0,025 мл діагностикуму.
Обов'язковими контролюми є:
Контроль сироватки діагностичної сальмонельозної адсорбованої рецептор Ви сухої та аналізованої сироватки, які у розведенні 1:10 в обсязі 0,05 мл вносять у дві контрольні лунки.
Перевірка відсутності спонтанної аглютинації діагностикуму, для чого дві лунки, що містять по 0,05 мл 0,9 % розчину натрію хлориду додають по 0,025 мл діагностикуму. Планшет струшують і поміщають на 1,5-2,0 год термостат при температурі (37+1) °С. ОБЛІК РЕЗУЛЬТАТІВ
Облік реакції здійснюється за чотирихресною системою:
4+ всі еритроцити аглютиновані та рівномірно покривають дно лунки;
3+ аглютиновані майже всі еритроцити. На їх тлі є малопомітне кільце з неаглютинованих еритроцитів, що осіли;
3+ поряд з рівномірним аглютинатом на дні лунки є осад з неаглютинованих еритроцитів у вигляді маленького «кільця» або «гудзика»;
1+ більшість еритроцитів неаглютиновані і осіли у вигляді маленького «кілечка» з рівними краями або «гудзики» у центрі дна лунки.
(-) ознак аглютинації немає. Еритроцити осіли у вигляді маленького «кільця» з рівними краями або ґудзиком у центрі лунки чи дна пробірки.
Позитивною вважається реакція не менше ніж на 3+.
Результати, отримані в РПГА можна вважати достовірними у тому випадку, якщо сироваткою діагностичної сальмонельозної адсорбованої рецептор Ві сухий 1:10 отримано позитивний результат у розведенні не нижче ніж 14 їх титрів, а в 2 лунках з аналізованої сироваткою і сироваткою діагностичної сальмонел сухий у розведеннях 1:10 не повинно бути пластівців та осаду; у лунках з 0,9 % розчином натрію хлориду та діагностикумом – реакція негативна.
Титром антитіл аналізованої сироватки вважається останнє розведення сироватки, яка ще дає позитивну аглютинацію еритроцитів.
Інтерпретація результатів.
Особи, у яких виявляються антитіла до Ві-антигена у розведенні 1:40 і вище, розглядаються як підозрілі на хронічне черевнотифозне бактеріоносійство. Однак, у зв'язку з тим, що діагноз не може бути поставлений лише на підставі серо-логічного дослідження, необхідне поглиблене бактеріологічне обстеження.
Запобіжні заходи при застосуванні
Діагностична сальмонельозна адсорбована рецептор Ві, що входять до складу набору сироватка, суха інактивована.
Аналізовані сироватки повинні бути інактивовані при температурі 56° протягом 30 хвилин.
Аналізовані сироватки, а також реагенти, обладнання та інструменти, що знаходяться з ними в контакті, можуть являти собою потенційно інфекційний матеріал, і поводитися з ним слід обережно:
Об'єктивні результати аналізу гарантуються при виконанні наступних умов:
