Принцип метода
Холинэстераза гидролизует бутирилциохолин до бутирата и тиохолина. Тиохолин реагирует с 5.5-дитиобис-2-нитробензойной кислотой (DTNB) до формы 5-меркапто-2-нитробензойной кислоты (5-MNBA) по следующими реакциями:
бутирилтиохолин + H2O → бутират + тиохолин
тиохолин + DTNB → 5-MNBA
Скорость образования 5-MNBA измеряется фотометрически и пропорционально активности фермента холинэстеразы в образце.
Клиническое значение
Холинэстераза это фермент, который присутствует в плазме и синтезируется печенью. Его подлинные физиологические функции неизвестны, возможно, что его функция – гидролизовать холин в плазме. Активность холинэстеразы, как правило, зависит от функции печени, является самым чувствительным тестом влияния фосфорорганических пестицидов и выявления больных с атипичными формами ферментов, представляющих высокую чувствительность к сукцинилхолину.
Клинический диагноз не должен основываться на одном показателе, необходимо учитывать клинические и другие лабораторные данные.
Состав набора
- Реагент 1. Буфер: Фосфатный буфер – 50 mmol/l (ммоль/л).
- Реагент 2. Субстрат: 5,5'-дитиобис-2-нитробензойная кислота - 0.25 mmol/l (ммоль/л); бутирилтиохолин - 7 ммоль/л (ммоль/л).
- Инструкция по использованию.
- Сертификат качества.
Аналитические характеристики
- Линейность измерительного диапазона: 50 – 10000 U/l (Од/л). Отклонение от линейности не превышает 5%. Если полученные результаты были больше, чем пределы линейности, разведите образцы 1:4 (в 5 раз) NaCl 9 g/l (г/л) и умножьте результат на 5.
- Чувствительность не менее 50 U/l (Од/л).
- Коэффициент вариации результатов определений – не более 5%.
Материал для исследования
Сыворотка или гепаринизированная плазма крови. Тестируемые сыворотки или плазмы должны быть тщательно отделены от форменных элементов крови не позднее, чем через 1 ч после взятия крови. Избегайте использования мутных, липидных и гемолитических образцов.
Стабильность образцов 7 d (сут) при 2-8 ºС.
Перечень необходимого оборудования
- cпектрофотометрическое или колориметрическое оборудование с длиной волны 405 nm (нм).
- подходящие кюветы с толщиной оптического слоя 1 cm (см).
- общее лабораторное оборудование.
Прим: Адаптации к полуавтоматическим и автоматическим приборам предоставляются по запросу
Подготовка реагентов
Перед использованием набор выдержать при комнатной температуре 30 мин (мин).
Приготовление рабочего реагента РР: растворить 5 таблеток Р2 во флаконе Р1 15 мл (мл). Закрыть крышкой, перемешать.
РР стабилен 2 ч (час) при 2-8 ºC.
Условия измерения:
- длина волны 405 nm (нм)
- кювета с толщиной оптического слоя 1 cm (см)
- температура. 25 ºС /30 ºС /37 ºC
Референтные величины
Основываясь на результатах исследований, проведенных лабораториями, рекомендуем пользоваться нижеприведенными нормами. Вместе с тем согласно правилам GLP (Хорошей лабораторной практики), каждая лаборатория должна сама определить для себя параметры нормы, характерные для обследуемой популяции.
| 1 | 2 | 3 | 4 |
|---|---|---|---|
| 25 ºС | 30 ºС | 37 ºС | |
| Концентрация, U/l (Од/л) | 3000-9300 | 3714-11513 | 4559-14443 |
Комплектация
| 1 | 2 | 3 |
|---|---|---|
| 1.030 | 1.031 | |
| Содержимое | 50 определ. | 100 определ. |
| Р1 | 5 х 15 мл (мл) | 10 х 15 мл (мл) |
| Р2 | 1 х 25 таблетка | 1 х 50 таблетка |