Принцип метода
Под действием фермента аспартатаминотрансферазы (АСТ) в результате переаминирования происходит перенос аминогруппы из аспартата на α-кетоглутарат. Образующийся в данной реакции оксалоацетат при участии фермента малатдегидрогеназы (МДГ) и кофермента НАДН2 превращается в малат.
L-аспартат + а-кетоглютарат АСТ --> глютамат + оксалацетат оксалацетат + NADH + H + МДГ --> молот + NAD +
Скорость окисления НАДН2 в ходе второй реакции определяется по уменьшению оптической плотности реакционной среды при 340 nm (нм) и пропорциональна активности АСТ, содержащейся в образце и измеряемом на фотометре.
Клиническое значение
АСТ – это клеточный фермент, который находится в высокой концентрации в сердечной мышце, клетках печени, клетках мышц скелета и в меньших объемах в других тканях. Повышенный уровень АСТ в сыворотке крови не является специфическим показателем заболевания печени. Используется, главным образом, для диагностики и контроля протекания болезней печени наряду с другими ферментами, такими как AЛТ и щелочная фосфатаза. Также определение АСТ используется для контроля состояния пациентов после инфаркта миокарда, болезни скелетных мышц и т.д.
Клинический диагноз не должен основываться только на одном показателе, необходимо учитывать клинические и другие лабораторные данные.
Состав набора
- Реагент 1. Буфер: трис рН 7.8 – 80 mmol/l (ммоль/л); ЛДГ – 800 U/l (Од/л); МДГ – 600 U/l (Од/л); L-аспартат – 200 mmol/l (ммоль/л).
- Реагент 2. Субстрат: NADH – 0.18 mmol/l (ммоль/л); a-кетоглуторат – 15 mmol/l (ммоль/л).
- Инструкция по использованию.
- Сертификат качества.
Аналитические характеристики
- Линейность измерительного диапазона: 4 – 260 U/l (Од/л). Отклонение от линейности не превышает 7%. Если полученные результаты были больше пределов линейности, разведите образцы 1:9 NaCl (в десять раз) 9 g/l (г/л) и умножьте результат на 10.
- Чувствительность не менее 4 U/l (Од/л).
- Коэффициент вариации результатов определений – не более 7%.
Материал для исследования
Сыворотка или плазма крови. Тестируемые сыворотки или плазмы должны быть тщательно отделены от форменных элементов крови не позднее, чем через 1 ч после взятия крови. Избегайте использования мутных, липидных и гемолитических образцов.
Перечень необходимого оборудования
- Спектрофотометрическое или колориметрическое оборудование с длиной волны 340 nm (нм).
- подходящие кюветы с толщиной оптического слоя 1 cm (см).
- общее лабораторное оборудование. Прим: Адаптации к полуавтоматическим и автоматическим приборам предоставляются по запросу.
Подготовка реагентов
Перед использованием набор выдержать при комнатной температуре 30 мин (мин). Приготовление рабочего реагента РР: смешать 4 объема Р1 (буфер) и 1 объем Р2 (субстрат). РР стабилен 7 дней при 2-8 ºC или 24 ч (час) при комнатной температуре 15-25 ºC.
Условия измерения:
- длина волны 340 nm (нм) – кювета с толщиной оптического слоя 1 cm (см)
- температура 25 ºC / 30 ºC / 37 ºC
Референтные величины
Основываясь на результатах исследований, проведенных лабораториями, рекомендуем пользоваться нижеприведенными нормами. Вместе с тем согласно правилам GLP (Хорошей лабораторной практики), каждая лаборатория должна сама определить для себя параметры нормы, характерные для обследуемой популяции.
| 1 | 2 | 3 |
|---|---|---|
| 25 ºC | 30 ºC | |
| Мужчины, U/l (Од/л) к | 19 | 26 |
| Женщины, U/l (Од/л) к | 16 | 22 |
Комплектация
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
|---|---|---|---|---|
| 1.037 1.013 1.014 1.015 | ||||
| Содержимое | 50 определ. | 100 определ. | 500 определ. | 1000 определ. |
| Р1 | 1 х 40 мл (мл) | 1 х 80 мл (мл) | 1 х 400 мл (мл) | 1 х 800 мл (мл) |
| Р2 | 1 х 10 мл (мл) | 1 х 20 мл (мл) | 1 х 100 мл (мл) | 1 х 200 мл (мл) |