Принцип метода
Мочевина гидролизуется ферментативно с образованием аммония (NH4+) и углекислого газа (CO2). Образовавшиеся ионы аммиака реагируют с салицилатом и гипохлоритом (NaClO), в присутствии катализатора нитропруссида, с формированием зеленого индофенола:
мочевина + H2O уреаза→ (NH4+)2 + CO2
NH4+ + Салицилат + NaClO нитропруссид → индофенол
Интенсивность цвета пропорциональна концентрации мочевины в образце.
Клиническое значение
Мочевина является конечным результатом метаболизма белков. Образуется в печени при их разрушении. Повышенный уровень мочевины в крови наблюдается при заболевании почек, сердца, желудочно-кишечных кровотечениях, злокачественных опухолях мочевыводящих путей и предстательной железы, болезни Аддисона, усиленном распаде белков, шоке, обезвоживании, диетах с избыточным уровнем.
Снижение мочевины в крови бывает физиологическим при беременности.
В моче увеличение мочевины происходит у больных злокачественной анемией, в результате гиперпротеиновой диеты, после приема салицилатов, при отравлении фосфором; снижение – у больных нефритом, ацидозом, паренхиматозной желтельницей, острой дистрофией печени, прогрессируя циррозом.
Клинический диагноз не должен основываться на одном показателе, необходимо учитывать клинические и другие лабораторные данные.
Состав набора
- Реагент 1. Буфер: фосфат – 50 mmol/l (ммоль/л); ЭДТА - 2 ммоль/л (ммоль/л); натрия салицилата - 400 mmol/l (ммоль/л); натрия нитропруссид - 10 ммоль/л (ммоль/л).
- Реагент 2. Буфер: Натрия гипохлорит – 140 mmol/l (ммоль/л); гидроксид натрия - 150 mmol/l (ммоль/л).
- Реагент 3. Энзимы: уреаза – 3000 U/ml (Од/мл).
- Стандарт. Водный раствор мочевины. Точная концентрация указана в сертификате качества.
- Инструкция по использованию
- Сертификат качества.
Аналитические характеристики
- Линейность измерительного диапазона: 2-33.3 ммоль/л (ммоль/л). Отклонение от линейности не превышает 5%. Если полученные результаты были больше пределов линейности, разведите образцы 1:1 (в два раза) NaCl 9 g/l (г/л) и умножьте результат на два.
- Чувствительность не менее 2 ммоль/л (ммоль/л).
- Коэффициент вариации результатов определений – не более 5%.
Материал для исследования
- Сыворотка или гепаринизированная плазма крови. Не используйте соли аммония или фтора в качестве антикоагулянтов. Тестируемые сыворотки или плазмы должны быть тщательно отделены от форменных элементов крови не позднее, чем через 1 ч после взятия крови. Избегайте использования мутных, липидных и гемолитических образцов.
- Моча суточная: развести образец 1:49 (в 50 раз) дистиллированной водой. Перемешать. Умножить результат на 50 (коэффициент разбавления). Сохраняйте образцы мочи при рН <4.
Образцы стабильны при 2-8 С в течение 5 d (сут).
Перечень необходимого оборудования
- cпектрофотометрическое или колориметрическое оборудование с длиной волны 580(540-600) nm(нм).
- подходящие кюветы с толщиной оптического слоя 1 cm (см).
- общее лабораторное оборудование.
Прим: Адаптации к полуавтоматическим и автоматическим приборам предоставляются по запросу.
Подготовка реагентов
Перед использованием набор выдержать при комнатной температуре 30 мин (мин).
Приготовление рабочего реагента РР: смешать Р3 в одном флаконе из Р1. Закрыть и аккуратно перемешать. При необходимости приготовления рабочего реагента в меньшем объеме следует смешать реагенты Р1 и Р3 в соотношении 100:1.
Внимание! РР стабилен 14 d (сут) при температуре 2-8 ºC в непрозрачной (темной) посуде.
Р2 готов к использованию.
Условия измерения:
- длина волны 580 (540-600) nm (нм)
- кювета с толщиной оптического слоя 1 cm (см)
- температура 37 ºC /15-25 ºC
Референтные величины
Основываясь на результатах исследований, проведенных лабораториями, рекомендуем пользоваться нижеприведенными нормами. Вместе с тем согласно правилам GLP (Хорошей лабораторной практики), каждая лаборатория должна сама определить для себя параметры нормы, характерные для обследуемой популяции.
Нормальные уровни мочевины составляют:
| 1 | 2 |
|---|---|
| Возрастные категории | Уровни мочевины |
| Кровь из пуповины | 7.5-14.3 ммоль/л (ммоль/л) |
| Недоношенные ( ≤ 1 неделя) | 1.1-8.9 ммоль/л (ммоль/л) |
| недоношенные ( ≤ 1 года) | 1.4-6.8 ммоль/л (ммоль/л) |
| Новорожденные/дети | 2.1-7.1 ммоль/л (ммоль/л) |
| 18-60 лет | 2.1-7.1 ммоль/л (ммоль/л) |
| 60-90 лет | 2.9-8.2 ммоль/л (ммоль/л) |
| ≥ 90 лет | 3.6-11.1ммоль/л (ммоль/л) |
| моча | 430-710 mmol/d (ммоль/сут) |
Комплектация
| 1 | 2 | 3 | 4 |
|---|---|---|---|
| 2.029 | 2.030 | 2.031 | |
| Содержимое | 100 определ. | 200 определ. | 300 определ. |
| Р1 | 1 х 100 мл (мл) | 1 х 200 мл (мл) | 1 х 300 мл (мл) |
| Р2 | 1 х 100 мл (мл) | 1 х 200 мл (мл) | 1 х 300 мл (мл) |
| Р3 | 1 х 1 мл (мл) | 2 х 1 мл (мл) | 3 х 1 мл (мл) |
| Стандарт | 1 х 1 мл (мл) | 1 х 2 мл (мл) | 1 х 3 мл (мл) |