Принцип метода
Мочевина гидролизуется ферментативно с образованием аммония (NH4+) и углекислого газа (CO2). Ионы аммония реагируют с -оксиглютаратом в присутствии глютаматдегидрогеназы (ГДГ, GLDH) и одновременно с окислением НАДФ до НАД+.
Мочевина + Н2O + 2Н+ уреаза→ (NH4+)2 + CO2
NH4+ + α-кетоглютарат + НАДФ ГДГ→ Н2O + НАД+ + L-глютамат
Уменьшение концентрации НАДФ, пропорционально концентрации мочевины в образце.
Клиническое значение
Мочевина является конечным результатом метаболизма белков. Образуется в печени при их разрушении. Повышенный уровень мочевины в крови наблюдается при заболевании почек, злокачественных опухолях мочевыводящих путей и предстательной железы, болезни Аддисона, усиленном распаде белков, шоке, обезвоживании, диетах с избыточным уровнем белков.
Снижение мочевины в крови бывает физиологическим при беременности.
В моче увеличение мочевины происходит у больных злокачественной анемией, в результате гиперпротеиновой диеты, после приема салицилатов, при отравлении фосфором; снижение – у больных нефритом, ацидозом, паренхиматозной желтельницей, острой дистрофией печени, прогрессирующим циррозом.
Клинический диагноз не должен основываться только на одном показателе, необходимо учитывать клинические и другие лабораторные данные.
Состав набора
- Реагент 1. Буфер: трис рН 7.8 – 80 mmol/l (ммоль/л); -кетоглюторат - 6 mmol/l (ммоль/л); уреаза – 75000 U/l (Ед/л).
- Реагент 2. Энзимы: ГДГ – 60000 U/l (Од/л); НАДФ – 0.32 ммоль/л (ммоль/л).
- Стандарт. Водный раствор мочевины. Точная концентрация указана в сертификате качества.
- Инструкция по использованию.
- Сертификат качества.
Аналитические характеристики
- Линейность измерительного диапазона: 2-50 ммоль/л (ммоль/л). Отклонение от линейности не превышает 5%. Если полученные результаты были больше пределов линейности, разведите образцы 1:1 (в два раза) NaCl 9 g/l (г/л) и умножьте результат на два.
- Чувствительность не менее 2 ммоль/л (ммоль/л).
- Коэффициент вариации результатов определений – не более 5%.
Материал для исследования
- Сыворотка или гепаринизированная плазма крови. Не используйте соли аммония или фтора в качестве антикоагулянтов. Тестируемые сыворотки или плазмы должны быть тщательно отделены от форменных элементов крови не позднее, чем через 1 ч после взятия крови. Избегайте использования мутных, липидных и гемолитических образцов.
- Моча: развести образец в пятьдесят раз дистиллированной водой. Перемешать. Умножить результат на 50 (коэффициент разбавления). Сохраняйте образцы мочи при рН < 4.
Образцы стабильны при 2-8 ºC в течение 5 d (сут).
Перечень необходимого оборудования
- cпектрофотометрическое или колориметрическое оборудование с длиной волны 340 nm (нм).
- подходящие кюветы с толщиной оптического слоя 1 cm (см).
- общее лабораторное оборудование.
Прим: Адаптации к полуавтоматическим и автоматическим приборам предоставляются по запросу
Подготовка реагентов
Перед использованием набор выдержать при комнатной температуре 30 мин (мин).
Приготовление рабочего реагента РР: смешать 4 объема Р1 (буфер) и 1 объем Р2 (энзимы).
РР стабилен 1 mth (мес) при 2-8 ºC.
Условия измерения:
- длина волны 340 nm (нм)
- кювета с толщиной оптического слоя 1 cm (см)
- температура 37 ºC
Референтные величины
Основываясь на результатах исследований, проведенных лабораториями, рекомендуем пользоваться нижеприведенными нормами. Вместе с тем согласно правилам GLP (Хорошей лабораторной практики), каждая лаборатория должна сама определить для себя параметры нормы, характерные для обследуемой популяции.
Нормальные уровни мочевины составляют:
Сыворотка или плазма крови: 2.5 – 7.5 ммоль/л (ммоль/л) = 150-450 мг/л (мг/л)
Азот мочевины: 7 – 21 мг/дл (мг/дл)
Моча: 329 - 581 ммоль/д (ммоль/сут) = 20 - 35 г/д (г/сут)
Переход в дополнительные единицы: mg/l (мг/л) x 0.01665 = mmol/l (ммоль/л).
Комплектация
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
|---|---|---|---|---|
| 2.025 | 2.026 | 2.027 | 2.028 | |
| Содержимое | 100 определ. | 300 определ. | 600 определ. | 1000 определ. |
| Р1 | 1 х 80 мл (мл) | 1 х 240 мл(мл) | 1 х 480 мл (мл) | 1 х 800 мл (мл) |
| Р2 | 1 х 20 мл (мл) | 1 х 60 мл (мл) | 1 х 120 мл (мл) | 1 х 200 мл (мл) |
| Стандарт | 1 х 2 мл (мл) | 1 х 5 мл (мл) | 1 х 10 мл (мл) | 1 х 15 мл (мл) |