Принцип метода
Мочевая кислота окисляется уриказой до алантоина и пероксида водорода (2H2O2), который под влиянием пероксидазы (ПОД, POD), 4-аминофеназона (4-АФ) и 2-4-дихлорфенола сульфаната (ДХФС) образует красный хининоаминовый комплекс:
Мочевая кислота + 2H2O + O2 уриказа →алантоин + CO2 + 2H2O2
2H2O2 + 4-АФ + ДХФС ПОД→ хининоамин + 4H2O
Интенсивность окраски комплекса прямо пропорциональна концентрации мочевой кислоты в образце.
Клиническое значение
Мочевая кислота и ее соли являются конечным продуктом метаболизма пурина. При прогрессирующей почечной недостаточности происходит задержка в крови креатинина и мочевой кислоты. Повышение уровня мочевой кислоты может свидетельствовать о почечной недостаточности, но в основном связано с подагрой.
Клинический диагноз не должен основываться только на одном показателе, необходимо учитывать клинические и другие лабораторные данные.
Состав набора
- Реагент 1. Буфер: фосфат рН 7.4 – 50 mmol/l (ммоль/л); ДХФС - 4 ммоль/л (ммоль/л).
- Реагент 2. Энзимы: уриказа – 60 U/l (Од/л); пероксидаза – 660 U/l (Од/л); аскорбат оксидаза – 200 U/l (Од/л); 4-аминофеназон - 1 ммоль/л (ммоль/л).
- Стандарт. Водный раствор мочевой кислоты. Точная концентрация указана в сертификате качества.
- Инструкция по использованию.
- Сертификат качества.
Аналитические характеристики
- Линейность измерительного диапазона: 12 – 1200 µmol/l (мкмоль/л).
- Отклонение от линейности не превышает 5%. Если полученные результаты были больше, чем пределы линейности, разведите образцы 1:1 (в два раза) NaCl 9 g/l (г/л) и умножьте результат на два.
- Чувствительность не менее 12 µmol/l (мкмоль/л).
- Коэффициент вариации результатов определений – не более 5%.
Материал для исследования
- Сыворотка или плазма крови. Тестируемые сыворотки или плазмы должны быть тщательно отделены от форменных элементов крови не позднее, чем через 1 ч после взятия крови. Избегайте использования мутных, липидных и гемолитических образцов. Образцы стабильны в течение 3-5 d (сут) при 2-8 ºC или 6 mth (мес) при -20 ºC.
- Суточная моча стабильна 4 d(сут) при 15-25 ºC, рН >8. Развести образец 1/50 в дистиллированной воде. Умножьте результат на 50 (коэффициент разбавления). Если моча мутная, подогрейте образец до 60 ºC 10 мин (мин) до растворения осадка уратов и мочевой кислоты. Не замораживать!
Перечень необходимого оборудования
- cпектрофотометрическое или колориметрическое оборудование с длиной волны 520 nm (нм).
- подходящие кюветы с толщиной оптического слоя 1 cm (см).
- общее лабораторное оборудование.
Прим: Адаптации к полуавтоматическим и автоматическим приборам предоставляются по запросу.
Подготовка реагентов
Перед использованием набор выдержать при комнатной температуре 30 мин (мин).
Приготовление рабочего реагента РР: смешать равные объемы Р1 (буфер) и Р2 (энзимы).
РР стабилен 1 wk (неделя) при хранении в холодильнике 2-8 ºC или 4 d (сут) при 15-25 ºC.
Условия измерения:
- длина волны 520 (490-550) nm (нм)
- кювета с толщиной оптического слоя 1 cm (см)
- температура 37 ºC /15-25 ºC
Референтные величины
Основываясь на результатах исследований, проведенных лабораториями, рекомендуем пользоваться нижеприведенными нормами. Вместе с тем согласно правилам GLP (Хорошей лабораторной практики), каждая лаборатория должна сама определить для себя параметры нормы, характерные для обследуемой популяции.
Сыворотка или плазма:
- женщины 25 - 68 mg/l (мг/л) = 149 - 405 µmol/l (мкмоль/л)
- мужчины 36 – 77 mg/l (мг/л) = 214 – 458 µmol/l (мкмоль/л)
Моча: 250 - 750 мг/д (мг/сут) = 1.49 – 4.5 ммоль/д (ммоль/сут)
Переход в дополнительные единицы: mg/l (мг/л) х 5.95 = µmol/l (мкмоль/л)
Комплектация
| 1 | 2 | 3 | 4 |
|---|---|---|---|
| 2.041 | 2.023 | 2.024 | |
| Содержимое | 50 определ. | 100 определ. | 500 определ. |
| Р1 | 1 х 25 мл (мл) | 1 х 50 мл (мл) | 1 х 250 мл (мл) |
| Р2 | 1 х 25 мл (мл) | 1 х 50 мл (мл) | 1 х 250 мл (мл) |
| Стандарт | 1 х 2 мл (мл) | 1 х 3 мл (мл) | 1 х 10 мл (мл) |