ПРИЗНАЧЕННЯ
Набір застосовується для визначення активності аланінамінотрансферази (АлАТ) у сироватці крові та плазмі людини кінетичним методом в клініко-діагностичних і біохімічних лабораторіях і науководослідницькій практиці.
- Лінійність методу повинна зберігатися до швидкості зміни оптичної щільності (ΔЕ/хв) 0,16 для хвиль Hg 334 нм, 340 нм або 0,08 для Hg 365 нм.
- Діапазон визначаємих активностей - від 3,9 МОд/л до 600 МОд/л.
- Коефіцієнт варіації визначення- не більше 5 %
- Чутливість 6 на 0,001 од. оптичної щільності/хв – не більше 3,5 МОд/л (365 нм).
- Зберігання набору - при температурі від плюс 2 °С до плюс 8 °С.
- Гарантійний термін придатності набору - 12 місяців від дня виготовлення.
- Набір призначений для застосування in vitro тільки кваліфікованим лабораторним персоналом.
ПРИНЦИП МЕТОДУ
АлАТ каталізує перенос аміно-групи від L-аланіну до α-оксоглютарату в результаті чього утворюються піруват та L-глютамат. Отриманий піруват під час спряженої реакції, що каталізується лактатдегідрогеназою (LDH) вступає в реакцію з NADH, в присутності іонів водню. Продуктами цієї реакції є Lлактат та NAD+.
L-аланін + α-оксоглютарат ←АлАТ → піровиноградна кислота + L-глутамат
піровиноградна кислота + NADH + H+ ←ЛДГ → L-лактат + NAD+
(НАДН и NAD+ - дві форми β-нікотінамід аденін дінуклеотиду)
Перетворення NADH в NAD+ супроводжується зміною в спектрі поглинання на довжині хвилі 340 або 334 або 365 нм, при цьому зменшення оптичної щільності розчину прямо пропорційне активності АлАТ в дослідній пробі.
СКЛАД НАБОРУ
- Буферно-субстратний розчин АлАТ
- ТРІС буфер (100,0 ± 5,0) ммоль/л,
- L-альфа-аланін (0,500 ± 0,025) моль/л,
НР001.02 - 1 флакон з (40 ± 2) мл; НР001.03 - 2 флакони по (40 ± 2) мл; НР001.04 - 4 флакони по (100 ± 2) мл;
- Коензим-ензимний реагент
- 2-оксоглутарова кислота (15,00 ± 0,75) ммоль/л
- NADH (0,180 ± 0,009) ммоль/л
- лактат-дегідрогеназа (LDH) >1200 Од/л
НР001.02 - 1 флакон з (10,0 ± 0,5) мл; НР001.03 - 2 флакони по (10,0 ± 0,5) мл; НР001.04 - 1 флакон з (100 ± 2) мл;
АНАЛІЗУЄМИЙ МАТЕРІАЛ
-
Сироватка. Матеріал стабільний протягом 3 діб при температурі від плюс 2 град. до плюс 8. Якщо зберігати сироватку при кімнатній температурі, активність ферментів знижується. Активність ферменту в сироватці знижується після 3 діб зберігання при температурі від плюс 18 °С до плюс 25 °С - на 17%. УНИКАТИ ГЕМОЛІЗУ!
-
Плазма. Гепаринізована або ЭДТО-плазма.
ОБЛАДНАННЯ
-
Фотометричне обладнання, яке здатне вимірювати оптичну щільність розчинів при довжині хвилі 334, 340 або 365 нм в діапазоні (0-1,0) од. опт. щільності та довжині оптичного шляху 10 мм. (Можливo використання автоматичного аналізатора. Інструкція для автоматичного аналізатора висилається за замовленням споживача.)
-
Водяний термостат або автоматична водяна баня, які здатні підтримувати температуру (плюс 37 ± 0,5)°С.
-
Піпетки місткістю 1, 0.1 та 5 мл (ДСТУ EN ISO 835:2018)