ВИКОРИСТАННЯ
Діагностичний набір для визначення активності лактатдегідрогенази, призначений для ручного аналізу (методи Sample Start та Reagent Start) та в декількох автоматичних аналізаторах. Реагенти повинні використовуватися лише для діагностики in vitro кваліфікованим лабораторним персоналом, лише за призначенням, за відповідних лабораторних умов.
Лактатдегідрогеназа (LDH, LD) є внутрішньоклітинним ферментом, що знаходяться у всіх тканинах. LDH каталізує відворотне перетворення лактату в піруват з використанням NAD+ в ролі кофактора. Дегідрогеназа є тетрамером, що містить два можливі типу субодиниць: Х і М. Розрізняють 5 ізоензимів, названих від LD-1 (Х4) до LD-5 (М4). Ізоензими виступають в різних пропорціях в кожному виді тканин і володіють різною електрофоретичної рухливістю, що і використано в діагностиці.
ПРИНЦИП МЕТОДУ
Метод кінетичний, рекомендований Німецьким Товариством Клінічної Хімії (DGKC). Швидкість зміни оптичної щільності на довжині хвилі λ=340 нм прямо пропорційна активності лактатдегідрогенази.
Склад набору
- 1-LDH 3 х 400 мл
- 2-LDH 1 х 300 мл
Реагенти при температурі 2-8 °С зберігають стабільність протягом усього терміну придатності, зазначеного на упаковці. Реагенти на борту апарату при температурі 2-10 °C стабільні 8 тижнів. Приготування і стабільність робочого розчину Визначення можна виконувати, користуючись окремими реактивами 1- LDH і 2-LDH або робочим реактивом. Для його приготування необхідно дуже обережно змішати реактиви 1-LDH і 2-LDH у співвідношенні 4+1. Уникати утворення піни! Термін придатності робочого реактиву: 5 днів при 2-8 °C 24 години при 15-25 °C
Концентрації в тесті
- Фосфатний буфер (рH 7.5) 50 ммоль/л
- Піруват 0.6 ммоль/л
- NADH 0.25 ммоль/л
- консервант
ДОДАТКОВЕ УСТАТКУВАННЯ
- Автоматичний аналізатор або фотометр, що дозволяє знімати покази при довжині хвилі 340 нм (Hg 334 нм, 365 нм);
- Термостат на 25 °С або 37 °C;
- Загальне лабораторне устаткування.
ЗРАЗКИ
Сироватка, гепаринізована плазма, без слідів гемолізу. Не використовуйте гемолізовану кров або сироватку, оскільки еритроцити містять у 150 разів більше активності ЛДГ, ніж сироватка. Як антикоагулянт для приготування плазми використовують літієву або амонійну сіль гепарину. Активність LDH нестабільна і швидко втрачається під час зберігання. Зразки можна зберігати до 4 годин при 15-25 ºC або 1-2 дні при 2-8 ºC. Проте, рекомендується проводити дослідження з використанням свіжозібраного біологічного матеріалу