Принцип методу
Сироваткові бета-глобуліни, гама-глобуліни та ліпопротеїни осаджуються при рН 7.55 тимоловим реактивом. Залежно від кількості та взаємного співвідношення окремих білкових фракцій при реакції виникає помутніння, інтенсивність якого вимірюють турбідиметрично.
Клінічне значення
Тимолова проба - осадова проба, що оцінює білково-синтетичну функцію печінки. При гепатиті А тимолова проба значно підвищена, причому максимально в ранні терміни жовтяничного періоду. При гепатиті В показник тимолової проби в більшості випадків в межах норми. Підвищення показників реєструється при посттрансфузійних гепатитах, важкому гепатиті В з наявністю гепатодистрофії, при дельта-гепатиті, а також при деяких інших інфекційних (мононуклеоз) і неінфекційних захворюваннях шлунково-кишкового тракту (наприклад, панкреатит).
Клінічний діагноз не повинен базуватися на одному показникові, необхідно враховувати клінічні та інші лабораторні дані.
Склад набору
- Реагент 1. Концентрований розчин тимолу.
- Реагент 2. Сірчана кислота – 2.5 mol/l (моль/л).
- Реагент 3. Барію хлорид – 48 mmol/l (ммоль/л).
- Інструкція з використання.
- Сертифікат якості.
Аналітичні характеристики
- Лінійність вимірювального діапазону: 0.5 - 20 S-H. Відхилення від лінійності не перевищує 10 %. Якщо отримані результати були більше, ніж межі лінійності, розведіть зразки 1:1 (в два рази) NaCl 9 g/l (г/л) та помножте результат на два.
- Чутливість не менш 0.5 S-H.
- Коефіцієнт варіації результатів визначень – не більш 10 %.
Матеріал для дослідження
Сироватка або плазма крові. Досліджувані сироватки або плазми повинні бути ретельно відокремлені від формених елементів.
Перелік необхідного устаткування
- Спектрофотометричне або колориметричне обладнання з довжиною хвилі 620-660 nm (нм).
- Відповідні кювети з товщиною оптичного шару 1 cm (см).
- Загальне лабораторне обладнання.
Підготовка реагентів
Перед використанням набір витримати при кімнатній температурі протягом 30 min (хв).
Робочий реагент. До мірної колби місткістю 1000 ml (мл) налити приблизно 900 ml (мл) дистильованої води та при постійному перемішуванні магнітною мішалкою піпеткою поступово додати 15 ml (мл) Р1. Кінчик піпетки повинен бути занурений у воду в колбі. Після повного розчинення 15-20 min (хв), довести дист. водою до мітки та перемішати ще 10 min (хв). Значення рН РР повинно дорівнювати 7.55±0.05 при температурі 25 С. При необхідності рН коригується 0.1 Н розчином HCl або NaOH. Стійкий кілька місяців при кімнатній температурі.
Розчин 2. До мірної колби місткістю 250 ml (мл) відміряти 10 ml (мл) Р2, довести до мітки дистильованою водою охолодженою до 8 С. Стійкий кілька місяців при кімнатній температурі.
Розчин 3. До мірної колби місткістю 50 ml (мл) відміряти 1.5 ml (мл) Р3, довести до мітки Розчином 2 охолодженим до 10 °C. Ретельно перемішати. Стійкий кілька mth (міс) при кімнатній температурі.
Калібрувальна крива. З Р2 і Р3 приготувати розчини помутніння, що відповідають одиницям помутніння по Shank-Hoagland (од. S-H). Відібрати та вносити в об'ємах, вказаних у таблиці.
| 1 | 2 | 3 | 4 |
|---|---|---|---|
| № | Розчин 2, ml (мл) | Розчин 3, ml (мл) | Одиниці помутніння, S-H |
| 1 | 4.5 | 1.5 | 5 |
| 2 | 3.0 | 3.0 | 10 |
| 3 | 1.5 | 4.5 | 15 |
| 4 | - | 6.0 | 20 |
Перемішати, інкубувати 30 min (хв). Перемішати, виміряти оптичну щільність проти дистильованої води.
Умови вимірювання:
- довжина хвилі 630 (620-690) nm (нм)
- кювета з товщиною оптичного шару 1 cm (см)
- температура 15-25 ºC
Референтні величини
Грунтуючись на результатах досліджень, проведених лабораторіями, рекомендуємо користуватися нормами, приведеними нижче. Разом з тим, відповідно до правил GLP (Гарної лабораторної практики), кожна лабораторія повинна сама визначити для себе параметри норми, характерні для обстежуваної популяції.
Тимолове помутніння 0.5 – 4 S-H
Граничні значення 4 – 5 S-H
Патологічні значення більш 5 S-H
Комплектація
| 1 | 2 |
|---|---|
| 2.035 | |
| Вміст | 330 визн. |
| Р1 | 1 х 17 ml (мл) |
| Р2 | 1 х 11 ml (мл) |
| Р3 | 1 х 5 ml (мл) |