Азур-еозин по Романовському розчин 1 л (900 г)

Розчин Азур-еозину за Романовським призначений для фарбування формених елементів крові. 1л барвника розрахований на фарбування 3-6 тис. мазків крові при розведенні барвника у 10-20 разів.

Принцип.

Фарбування різних елементів клітин у різні кольори та відтінки сумішшю основних (азур II) та кислих (водорозчинний жовтий еозин) фарб.

Запобіжні заходи:

Потенційний ризик застосування набору – клас 2б.

При роботі з набором необхідно дотримуватись "Правил пристрою, техніки безпеки, виробничої санітарії, протиепідемічного режиму та особистої гігієни при роботі в лабораторіях (відділеннях, відділах) санітарно-епідеміологічних установ системи Міністерства охорони здоров'я.

При роботі з біологічними рідинами слід надягати одноразові гумові або пластикові рукавички, оскільки досліджуваний матеріал є потенційно інфікованим, здатним тривалий час зберігати або передавати ВІЛ, гепатит або будь-який інший збудник вірусної інфекції.

Усі використані матеріали дезінфікувати відповідно до вимог МУ-287-113.

Посуд та апаратура.

• Секундомір;

• Мікроскоп;

• рН-метр;

• Циліндри мірні місткістю 25-1000 мл;

• Скельця предметні;

• Папір фільтрувальний;

• Рукавички гумові;

• Калій фосфорнокислий однозаміщений;

• Натрій фосфорнокислий двозаміщений;

• Вода дистильована.

• Градуйована піпетка.

• Штатив для мазків.

• Кювета зі скляним містком для фарбування.

Приготування забуференої води:

Зважити на аналітичних терезах з точністю ±0,01 г 9,50 г натрію фосфорнокислого двозаміщеного безводного або 22,70 г натрію фосфорнокислого двозаміщеного 12-водного; навішування перенести в мірний циліндр місткістю 1000 мл, додати 900 мл дистильованої води, перемішати до розчинення, довести до 1000 мл дистильованою водою і ретельно перемішати (розчин 1).

Зважити на аналітичних терезах з точністю ±0,01 г 9,07 г калію фосфорнокислого однозаміщеного; навішування внести в мірний циліндр місткістю 1000 мл, додати 900 мл дистильованої води, перемішати до розчинення, довести до 1000 мл дистильованою водою і ретельно перемішати (розчин 2).

Внести в мірний циліндр місткістю 1000 мл 63 мл розчину 1 і 37 мл розчину 2 довести до 1000 мл дистильованою водою і визначити рН отриманої забуференої води на рН-метрі; рН повинен бути в діапазоні 6,8 - 7,2. Отриману забуферену воду можна зберігати за кімнатної температури (+18/+25°С).

Реактиви.

У продажу є готовий розчин фарби Романівського, а також суха фарба Романовського (Гімзи), з якої готують розчин наступним чином: 3,8 г сухої фарби Романовського розчиняють у 250 мл чистого метилового або етилового спирту (останній гірше).

Розчин залишають на 3-5 діб, часто збовтуючи для кращого розчинення фарби.

Потім додають 250 мл чистого гліцерину і знову залишають на 3-5 діб, періодично збовтуючи. Приготовлена таким чином фарба добре зберігається тривалий час у темних суліях у шафі, де немає ні кислот, ні лугів.

Знову отриманий або приготовлений розчин барвника Романовського перед вживанням відтитрують, тобто забарвлюють кілька фіксованих мазків крові протягом 25-40 хв по-різному розведеною фарбою (1-2 краплі фарби на 1 мл дистильованої води). За добре забарвленим препаратом встановлюють потрібну кількість крапель фарби на 1 мл води та час фарбування.

ПРОВЕДЕННЯ АНАЛІЗУ

(методика забарвлення): Мазки необхідно зафіксувати фіксатором-барвником по Май-Грюнвальду або типу Лейшмана протягом 2-3 хвилин. Безпосередньо перед фарбуванням приготувати робочий розчин: змішати барвник із забуференою водою у співвідношенні 1:20 – 1:45 і профільтрувати.

Отриманий робочий розчин барвника можна використовувати протягом 6 годин.

Зафіксовані мазки крові помістити в робочий розчин барвника, через 20-45 хв препарати промити проточною водою 1-2 сек, висушити на повітрі і мікроскопувати.

РЕЗУЛЬТАТ фарбування:

Забарвлення формених елементів крові має бути наступним:

• еритроцити – рожеві, рожеві з сірим або бежевим відтінком, бежево-коричневі;

• тромбоцити – рожево-фіолетові або фіолетові;

• ядра лімфоцитів, моноцитів та нейтрофілів - фіолетові;

• цитоплазма лімфоцитів – блакитна, сіро-блакитна або синьо-блакитна;

• цитоплазма моноцитів-сіро-блакитна;

• цитоплазма нейтрофілів – блідо-рожева або рожево-сіра;

• зернистість нейтрофілів – фіолетова або червоно-фіолетова;

• зернистість еозинофілів-оранжево-червона, рожево-червона або рожево-фіолетова;

• зернистість базофілів-фіолетова

Забарвлення за Романовським у модифікації Філіпсона.

Принцип.

Застосування барвників-фіксаторів, якими мазки крові в перший період одночасно фіксуються і частково забарвлюються, а в другий період після розведення барвників-фіксаторів дистильованою водою, прифарбовуються остаточно.

Посуд та апаратура – див. «Забарвлення за Романовським».

Реактиви.

1. Одну частину готової фарби Романовського та 3 частини етилового спирту (ректифікату) ретельно змішують. Фарба відразу придатна до вживання, але можна готувати її і заздалегідь.

2. Дистильована вода нейтральної реакції.

Методика.

Приготований барвник наливають на нефіксований мазок, повністю покриваючи його і через 1 - 1 хвилину 30 сек, не зливаючи барвника, додають до нього але краплях приблизно стільки ж дистильованої води, стежачи за тим, щоб вода при з'єднанні з барвником не зливалася з мазка. Через 20-30 хв барвник змивають водою і мазок висушують.

Цим способом клітини забарвлюються добре, але іноді, мабуть, від недоброякісності спирту в еритроцитах виявляються дрібні бульбашки, що заважають визначенню ступеня насичення гемоглобіном.

Способи швидкого забарвлення мазків фарбою Романовського за Олексієвим.

Принцип.

Одночасна фіксація та фарбування мазків із застосуванням для прискорення фарбування за першим способом підігріву дистильованої води та за другим способом – підігріву розведеної фарби Романовського.

Посуд та апаратура.

1. Очні піпетки.

2. Водяна баня.

3. Темна сулія з притертою пробкою ємністю 1 л. Решта – див. «Забарвлення за Романовським».

Реактиви.

1. Розведена фарба Романовського (1,5 краплі фарби на 1 мл дистильованої води).

2. Барвник Лейшмана для другого методу (розчиняють 4 г сухої фарби в 1 л метилового спирту та зберігають у темному посуді).

3. Чистий метиловий спирт.

4. Нейтральна дистильована вода.

5. Фільтрувальний папір.

Методика.

1. На сухий нефіксований мазок наносять очною піпеткою 6-10 крапель фарби Романовського, розподіляючи її тією ж піпеткою рівномірним шаром. Через 30 з іншою піпеткою додають до фарби по краплях подвоєну кількість підігрітої до 50-60 ° дистильованої води. Похитуванням препарату перемішують фарбу з водою і залишають на 3 хв у спокої, потім змивають дистильованою водою і висушують мазок фільтрувальним папером. При цьому методі фарбування частково гемолізуються еритроцити, проте клітини білої крові не змінюються.

При другому способі, наведеному нижче, результати виходять кращим забарвленням препаратів мало відрізняється від звичайного забарвлення за Романовським.

2. На сухий нефіксований мазок наливають рівномірним шаром 10-12 крапель фарби Лейшмана. Через 20-30 с, не зливаючи фарбу, додають до неї нагрітий до 50-60 ° розчин фарби Романовського в кількості, здатній утриматися на препараті. Через 3 хв, не зливаючи фарбу, змивають її сильним струменем дистильованої води та висушують препарат фільтрувальним папером.