Набор предназначен для дифференциальной окраски гинекологических и негинекологических препаратов при цитологической диагностике и скрининге по Папаниколау в клинико-диагностических лабораториях и научно-исследовательской практике.
Набор рассчитан на количество проведения анализов до 2000
- Хранение набора - при температуре от плюс 2 °С до плюс 8 °С.
- Гарантийный срок годности набора - 12 месяцев со дня изготовления.
- Хранить в защищенном от света месте. Набор предназначен для применения in vitro только квалифицированным лабораторным персоналом
ПРИНЦИП МЕТОДА
При окраске по Папаниколау последовательно применяются
- краситель гематоксилин для окраски ядер,
- красители OG6 и ЕА для окраски цитоплазмы в разные цвета в зависимости от типа клеток и их зрелости.
При окраске в комбинированной цитоплазматической окраске ЕА происходит сначала быстрое окрашивание цитоплазмы эозином в розовый цвет, затем часть клеток перекрашивается в зеленый цвет в результате действия красителя светло-зеленый SF и протравы - фосфорновольфрамовой (или фосфорномотибденовой) кислоты.
СОСТАВ НАБОРА
- Раствор гематоксилина
- НР053.01 - 2 флакона по (100 ± 2) мл;
- НР053.02 - 1 флакон с (500 ± 10) мл;
- НР053.03 - 1 флакон с (1000 ± 20) мл;
- НР053.04 - 2 флакона по (1000 ± 20) мл;
- Окраситель ОG6
- НР053.01 - 2 флакона по (100 ± 2) мл;
- НР053.02 - 1 флакон с (500 ± 10) мл;
- НР053.03 - 1 флакон с (1000 + 20) мл;
- НР053.04 - 2 флакона по (1000 ± 20) мл;
- Окраситель ЕА
- НР053.01 - 2 флакона по (100 ± 2) мл;
- НР053.02 - 1 флакон с (500 ± 10) мл;
- НР053.03 - 1 флакон с (1000 ± 20) мл;
- НР053.04 - 2 флакона по (1000 ± 20) мл;
Дополнительные реагенты (не входят в набор)
- Концентрат промывочного раствора
- Раствор для дегидратации
- Просветляющий раствор
- Монтирующая (заключительная) среда
- Иммерсионное масло для микроскопии
Гинекологические и негинекологические образцы
Предметное стекло перед исследованием обезжиривают и делают на нем мазок исследуемых культур. Мазок следует делать тонким, чтобы клетки равномерно распределялись на поверхности стекла и не образовывали скоплений. Хорошо расплющенные клетки являются лучшими для оптимального окрашивания и отражения. Свежие нефиксированные клетки идеально распределяют в виде монослоя на предметное стекло или собирают на мембранный фильтр и немедленно влажно фиксируют в 95% этиловом спирте. Нерасплющенные клетки могут образовывать значительно больше пятен и затруднять микроскопическое исследование. Отсутствие сглаживания в клетках может быть связано со следующим: (1) сбором в консерванте (то есть равном объеме 50-70% спирта), (2) распределением по альбуминизированным стеклам, (3) толстым спредом, (4) частями фрагмента ткани, (5) суспензия в потоке слизи, (6) фиксация спреем.
Вышеупомянутые обстоятельства связаны между собой тем, что во время фиксации клетки фактически находятся в суспензии, и таким образом становятся затвердевшими сферами, которые не могут расплющиться.
ОБОРУДОВАНИЕ
- Раковины или специальные вместительные лотки для окрашивания.
- Специальный штатив («рейки») для окрашивания мазков на предметных стеклах.
- Пинцет или щипцы для взятия предметных стекол.
- Колба мерная вместимостью 1000 мл (согласно действующим нормативным документам).
- Фильтровальная бумага размером <4 х 1,5 см для промокания мазков.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Ядра клеток - сине-фиолетового цвета, с четкой структурой хроматина, при которой заметны краевой гиперхроматоз, пикноз, лизис и ядрышки.
Цитоплазма окрашена контрастно: при базофилии - в зеленый цвет различной интенсивности, которая определяется плотностью цитоплазмы; при ацидофилии - от бледно-желтого до ярко-оранжевого у зрелых клеток. В случае неполного ороговения цитоплазмы возможно окрашивание части ее в зеленый цвет, другой части - в оранжевый.
- Поверхностные (ороговевшие) клетки - розовые.
- Промежуточные (некорнифицированные) клетки - зеленые.
- Кандида (монилии) - красная.
- Трихомонады - серо-зеленые.
- Цитоплазма парабазальных клеток - темно-зеленого цвета.
- Красные кровяные клетки - оранжевый.
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Цитоморфология отражает клеточное здоровье и заболевания. Цитоплазма указывает на функциональную дифференциацию клетки, а ее ядро сигнализирует о нормальной или аномальной активности роста. С помощью светового микроскопа интерпретация значения цитоморфологических структур наиболее удобна для окрашенных клеток, поскольку неокрашенные клетки практически незаметны. Биологическое поведение клеток можно оценить качественно и количественно как с точки зрения активности роста, так и функциональной дифференциации. Если правильно окрасить гематоксилином, ядра клеток видны, хотя их цитоплазма будет плохо различима, и вероятность обнаружения и идентификации аномальных клеток во время скрининга будет уменьшена. Этого можно избежать с помощью окрашивания цитоплазмы клеток в контрастный цвет (то есть контрокрашивания). Использование одного контрастного окрашивания окрашивает разные типы клеток одинаково, и они выглядят одинаковыми. При использовании нескольких контрастных цветов разные