Набор предназначен для использования в качестве фиксатора при обработке биологических тканей или клинических образцов в клинико-диагностических лабораториях и научно-исследовательской практике.
Хранение набора - при температуре от плюс 2 °С до плюс 18 °С. Хранить и использовать в проветриваемом или вентилируемом помещении! Гарантийный срок годности набора - 24 месяца со дня изготовления. Набор предназначен для применения in vitro только квалифицированным лабораторным персоналом.
ПРИНЦИП МЕТОДА
Для закрепления материала на стекле высушенный мазок подвергают фиксации, основанной на свертывании белковых веществ. Фиксация, вызывая коагуляцию белка, прикрепляет препарат к стеклу. Кроме того, при фиксации мазок закрепляется на поверхности предметного стекла, и поэтому при последующей окраске препарата микробные клетки не смываются. Кроме того, убитые микробные клетки окрашиваются лучше, чем живые. Мазки следует подвергать фиксации сразу после высушивания. Выбор фиксирующей жидкости в значительной степени зависит от цели и задач исследований, вида материала, химических свойств веществ и срока изготовления препаратов. Жидкость Карнуа - универсальный фиксатор для большинства гистологических и гистохимических исследований (кроме выявления липидов), обычно рекомендуют для фиксации хромосом, лимфатических узлов и срочных биопсий. Для выявления нуклеиновых кислот и белковых соединений в качестве фиксирующего средства лучше всего использовать жидкость Карнуа.
ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАБОЧИХ РАСТВОРОВ
Жидкость Карнуа - готова к использованию. Пригодна для работы до истечения срока, указанного на упаковке, при условии хранения при температуре от плюс 2 °С до плюс 18 °С.
ОБОРУДОВАНИЕ
- Специальная посуда для фиксации или стаканы, обрезанные до высоты 6-6,5 см.
- Пинцет.
- Штатив для сушки мазков на воздухе.
- Предметные стекла.
- Перчатки резиновые или пластиковые.
ПРОВЕДЕНИЕ ФИКСАЦИИ
- Всю работу выполняют в вытяжном шкафу в защитных перчатках.
- Фиксацию выполняют в соответствии с выбранной методикой.
- Невозможно повторное использование фиксатора.
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для достижения качественной фиксации необходимо, чтобы фиксатор как можно быстрее достиг глубинных слоев фиксируемого материала, прежде чем прижизненное состояние структур будет нарушено в результате аутолитических процессов, проходящих внутри погибшей клетки.
Для этого объем фиксирующего раствора должен превышать объем фиксируемого материала в 20–100 раз. Сам материал необходимо зафиксировать как можно быстрее после взятия (биопсии или убийства подопытного животного). С последним требованием связаны и ограничения по размеру фиксируемого объекта: его диаметр должен быть 1-3 мм, но не более. Ведь с увеличением размера возрастает время проникновения фиксатора в глубинные его слои, а это может ухудшить качество материала в результате аутолитических процессов. Жидкость Карнуа вызывает гемолиз эритроцитов, сжатие тканей и растворение кислоторастворимых клеточных гранул и пигментов. Обработка жидкостью Карнуа не вызывает заметной потери кальция в течение 2-3 часов, необходимых для фиксации. Она обеспечивает превосходную фиксацию клеточных ядер. В ней хорошо сохраняются тельца Нисселя и фиксируются многие цитоплазматические структуры; миелин растворяется. Жидкость Карнуа является хорошим фиксатором ядер клеток, а также хорошо сохраняет почти все цитоплазматические структуры. Ее используют как фиксатор для выявления нуклеиновых кислот, белковых функциональных групп, гликогена, гликозаминогликанов, многих ферментов, минеральных веществ.
ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТЬ ФИКСАЦИИ
- Тонкие кусочки тканей (3-5 мм) в течение 4-5 часов при 25 °С или, возможно, лучше, 18-24 часа при 3-5 °С.
- 2-4 часа при 4 °С или 1-2 часа при 20 °С. Затем материал помещают в 100% спирт. Если материал не подлежит немедленному проведению, его можно перенести в 96% спирт и держать в нем до 3 суток.
- Не более 5 часов при температуре +20—25 °С или 18—24 часа при температуре +3— 5 °С. После фиксации материал быстро переносят в абсолютный этиловый спирт, затем — заливают в парафин или целоидин.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ
Необходимо применение специальной защитной одежды и перчаток. Необходимо тщательно соблюдать специальные инструкции и технику безопасности.